新型荧光试剂的合成及标记方法研究

摘要

荧光衍生化方法是提高色谱检测灵敏度的重要途径。本论文以发展新型荧光试剂及标记方法为目标，制备了多种新型荧光衍生化试剂，并建立了相应的HPLC分离分析方法。 采用量子化学计算方法，对咔唑和吖啶酮类荧光试剂分子进行了几何构型优化和荧光激发光谱计算研究。通过设计合理的反应路线，制备了以咔唑为母体荧光团的新型羰基标记荧光试剂-咔唑-9-乙氧基碳酰肼(CEOC-Hydrazide)，以二氟化硼-二吡咯甲烷为母体荧光团的活性环氧基荧光试剂-1，3，5，7-四甲基-8-苯基-(4-氧基-(3-环氧丙基))-二氟化硼-二吡咯甲烷(TMEPBODIPY)，以及基于1，2-苯并-3,4-二氢咔唑荧光团的标记试剂-1，2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙基-对甲苯磺酸酯(BDETS)和1，2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙氧基碳酰肼(BCEOC-Hydrazide)。衍生反应不仅快速、简单，而且可以显著改善样品的分离度和检测灵敏度。 研究了新型羰基标记荧光试剂，CEOC-Hydrazide和BCEOC-Hydrazide，对糖醛类化合物的衍生反应，并发展了相应的HPLC分离分析方法。衍生反应可在水浴中进行；对甲醛的衍生反应可在30min内完成；糖类化合物和甲醛的衍生物平均检出限分别达到35fmol和9.8fmol。 建立了羧基标记荧光试剂BDETS和9-(2-羟乙基)-吖啶酮(HEA)对10种胆汁酸的柱前衍生HPLC分析方法。衍生反应条件温和；两者与胆汁酸衍生物的平均检出限分别达到8.3fmol和149.1fmol。 进一步完善了咔唑-9-乙基氯甲酸酯(CEOC)作为实用荧光试剂对脂肪胺的衍生及HPLC的分离分析方法。衍生反应可在5min内完成；23种衍生物的分离仅需1h。此外，也将其应用于芳香胺和酚类化合物的分析中，平均检出限分别达到7.6fmol和162.4fmol。 将具有活性环氧基团的荧光试剂TMEPBODIPY和3-环氧丙基荧光素(EPF)应用于对蛋白质的荧光标记。通过对比实验，证明了这两种试剂可以对蛋白质进行选择性标记，有望在蛋白质组学研究中发挥重要作用。

目录

文摘

英文文摘

第一章文献综述

第一节荧光的基础理论

第二节衍生反应方式及试剂的构成和要求

第三节荧光衍生化试剂的类型及其应用

第四节本论文的工作

参考文献

第二章咔唑和吖啶酮类衍生物的量子化学研究

第三章新型羰基标记荧光试剂的合成及对糖醛的柱前衍生HPLC方法研究

第四章新型羧基标记荧光试剂的合成及对胆汁酸的柱前衍生HPLC方法研究

第五章咔唑-9-乙基氯甲酸酯对氨类和酚类化合物的柱前衍生HPLC方法研究

第一节咔唑-9-乙基氯甲酸酯的制备

第二节咔唑-9-乙基氯甲酸酯对脂肪族氨类化合物的柱前衍生方法研究及色谱分析

第三节咔唑-9-乙基氯甲酸酯对芳香胺柱前衍生HPLC方法研究

第四节新型氯甲酸酯类荧光试剂对酚类柱前衍生HPLC方法研究

本章小结

参考文献

第六章新型活性环氧基荧光试剂的合成及对蛋白质的荧光标记

作者简介及发表文章目录

致谢