OPG/RANK/RANKL在牙周炎与血管钙化关系中的作用研究

摘要

目的：本项目在成功建立牙周炎血管钙化联合动物模型的基础上，研究OPG/RANK/RANKL系统在牙周炎联合血管钙化大鼠动物模型中的表达及其可能的作用。
　　方法:
　　1.SPF级雄性wistar大鼠随机分为4组，正常对照组（C组）、血管钙化组（VDN组）、牙周炎组(CP组)和牙周炎血管钙化联合组（CP+VDN组），并按照相应的方法建立动物模型。模型建立成功后,取龈沟液、血清、胸腹主动脉及含上颌第二磨牙的上颌骨进行实验。牙周探诊深度及龈沟出血指数、牙齿颌骨联合病理切片观察牙周牙髓组织的改变；血管组织钙含量测定、碱性磷酸酶活性测定及病理学观察血管组织的改变。
　　2.OPG和RANKL在牙周组织的检测：ELISA法和免疫组化法检测OPG和RANKL在龈沟液和牙周牙髓组织中的表达。
　　3.OPG和RANKL在血管组织的检测：分别采用免疫组化、荧光定量RT-PCR、Western-blot及ELISA法检测OPG和RANKL在血管组织及血清中的表达。
　　结果：
　　1.我们成功建立了牙周炎联合血管钙化动物模型。
　　牙周检查显示：与对照组相比，CP组、VDN组和CP+VDN组均有不同程度的炎症表现：
　　（1）CP组和CP+VDN组牙周探诊深度和龈沟出血指数较C组和VDN组明显增加（P＜0.05)。
　　（2）组织病理检查发现CP组和CP+VDN组龈乳头根向迁移、骨质破坏较C组和VDN组严重。
　　血管组织检测发现：
　　（1）血管组织钙含量、碱性磷酸酶活性测定显示VDN组、VDN+CP组显著高于CP组、C组(P＜0.05)。
　　（2）大鼠血管组织病理检查显示C组无组织学形态的改变，其他三组均可见不同程度的中膜弹性纤维排列疏松紊乱，延展性降低。
　　2. OPG和RANKL在牙周牙髓组织的表达：
　　（1）龈沟液ELISA检测结果发现：CP、VDN组龈沟液中OPG低表达、RANKL高表达，C组和CP+VDN组OPG高表达、RANKL低表达，RANKL/OPG比值在CP、VDN组高于C组和CP+VDN组，且存在统计学差异（P＜0.05），CP+VDN组与C组相比OPG、RANKL的表达及RANKL/OPG比值变化均不明显且无统计学差异（P＞0.05）。
　　（2）牙周组织免疫组化结果显示：C组大鼠牙周组织OPG强阳性表达，高于其他三组； CP组、VDN组和CP+VDN组大鼠牙周组织RANKL强阳性表达，C组RANKL表达最弱；RANKL/OPG比值在CP+VDN组最高，C组最低，且有统计学差异（P＜0.05)。
　　（3）牙髓免疫组化结果显示：C组大鼠牙髓组织OPG强阳性表达，CP组、VDN组和CP+VDN组大鼠牙髓组织RANKL强阳性表达，RANKL/OPG比值CP+VDN组最高，C组最低，且有统计学差异（P＜0.05)。
　　3.OPG和RANKL在血管组织的表达：OPG和RANKL血清学、血管免疫组化、荧光定量PCR及Western-blot均显示与对照组相比，CP组、VDN组OPG的表达均下降，低于正常对照组（P＜0.05)，CP+VDN组OPG的表达与对照组相当，无显著差异（P＞0.05）； CP组、VDN组RANKL强阳性表达，CP+VDN组和C组RANKL的表达则相对较少；RANKL/OPG比值在CP组、VDN组比C组和CP+VDN组高，且有统计学差异（P＜0.05)，CP+VDN组RANKL/OPG比值与对照组相当且无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：OPG/RANK/RANKL系统在牙周炎与血管钙化相互关系中起重要作用。当牙周炎与血管钙化同时存在时，OPG、RANKL的表达不是两组结果的叠加，以OPG、RANKL作为标志时需要考虑另一种疾病的存在和影响。

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引言

第一部分 动物模型的建立

1.1材料与设备

1.1.1 实验动物

1.1.2 主要试剂及来源

1.1.3 主要仪器及来源

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型的分组及建立

1.2.2 标本的制备

1.2.3 牙周组织相关指标的检测

1.2.4 血管组织相关指标的检测

1.2.5 数据处理

1.3结果

1.3.1牙周组织相关指标检测

1.3.2 血管组织相关指标的检测

第二部分 牙周组织OPG、RANKL的检测

2.1 材料与设备

2.2 实验方法

2.2.1 龈沟液OPG、RANKL的检测

2.2.2 牙周牙髓组织OPG、RANKL免疫组织化学染色

2.2.3 统计学分析

2.3结果

2.3.1 龈沟液OPG、RANKL的表达及RANKL／OPG比值变化

2.3.2 牙周组织OPG、RANKL免疫组织化学结果

2.3.3 牙髓组织OPG、RANKL免疫组织化学结果

第三部分 血管组织OPG、RANKL的检测

3.1材料与设备

3.1.1主要试剂及来源

3.1.2主要溶液配制

3.1.3主要仪器及来源

3.2.实验方法

3.2.1 免疫组化检测血管组织OPG、RANKL的表达

3.2.2 荧光定量PCR检测血管组织中OPG、RANKL的表达

3.2.3 Westernblot 检测血管组织中OPG、RANKL的表达

3.2.4 ELISA（双抗体夹心酶联免疫吸附法）检测血清中OPG、RANKL中的表达

3.3结果

3.3.1 免疫组化检测血管组织OPG、RANKL的表达

3.3.2 荧光定量PCR检测血管组织中OPG、RANKL的表达

3.3.3 Westernblot 检测血管组织中OPG、RANKL的表达

3.3.4 血清中OPG、RANKL的表达

讨论

1.动物模型的建立

2.牙周炎与血管钙化

3. OPG/RANK/RANKL在牙周组织的表达

4. OPG/RANK/RANKL在血管的表达

结论

参考文献

综述:OPG/RANK/RANKL在牙周炎与血管钙化关系中的作用研 究

攻读学位期间的研究成果

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