NLRP3炎症小体激活及其在真菌性角膜炎固有免疫中的作用机制

摘要

目的：探讨NLRP3（Nod-like receptor protein-3，NLRP3）炎症复合体在烟曲霉菌感染的人角膜上皮细胞中的作用，及其激活方式。
　　方法：将研究对象设为体外培养的人永生化角膜细胞（HCECs）。本实验分为2部分。（1）以未加任何刺激的HCECs为空白对照组，以烟曲霉菌菌丝刺激的HCECs为实验组，在4、6、8、12、16h、24h用Real-time PCR法检测NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA，在8,16、24、36h时间点用Western Blot法检测NLRP3蛋白表达；（2）以体外培养的未加真菌刺激的HCECs为空白对照组，实验组细胞先加入不同浓度的格列本脲（Glyburide）预刺激两小时，然后加入烟曲霉菌菌丝刺激，在12小时时间点用real-time PCR法检测NLRP3 mRNA，在24小时时间点用Western Blot法检测NLRP3蛋白表达，在24小时时间点用ELISA法检测IL-1β蛋白表达。
　　结果：（1）烟曲霉菌菌丝抗原刺激后可引起NLRP3、ASC、caspase-1基因水平表达量相对增高，时间依赖性，12h达到峰值；烟曲霉菌菌丝抗原刺激后可引起NLRP3蛋白水平表达量相对增高，呈时间依赖性，24h达到峰值；(2)在不同浓度的格列本脲抑制炎症小体的情况下，NLRP3基因表达量降低，并呈剂量依赖性，400mM为最佳刺激浓度；并且400mM格列本脲可使NLRP3和IL-1β蛋白表达量降低。其表达变化差异均有统计学意义。
　　结论：在人类正常角膜上皮细胞中，存在NLRP3炎症小体，并且在烟曲霉菌菌丝刺激下，组成NLRP3炎症小体的各因子表达上升；在NLRP3炎症小体特异性抑制剂格列本脲（Glyburide）的抑制下，NLRP3和IL-1β基因和蛋白表达量降低，可以推测该小体在人角膜上皮细胞固有免疫中发挥重要作用。

目录

引言

第一章 材料和方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3.统计学处理

第二章 结 果

2.1 烟曲霉菌的形态学观察

2.2 永生化人角膜上皮细胞（THCE）的形态学观察

2.3 NLRP3炎症复合体在烟曲霉菌菌丝刺激人角膜上皮细胞中表达

2.4 Glyburide抑制烟曲霉菌刺激下的细胞NLRP3炎症复合体的表达

2.5．在NLRP3炎症复合体参与激活下游炎症因子IL-1β

第三章 讨 论

结论

参考文献

综述:NLRP3炎症复合体在抗真菌固有免疫中的作用

附录

攻读学位期间的研究成果

致谢

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