植酸对二甲肼诱导的结直肠癌大鼠模型肠粘膜机械屏障的影响

摘要

目的：通过建立二甲肼（DMH）诱导的结直肠癌大鼠模型，观察不同剂量植酸干预对结直肠癌大鼠肠粘膜机械屏障粘液层MUC2和TFF3蛋白及三种紧密连接蛋白的影响，探讨植酸对结直肠癌大鼠模型肠粘膜机械屏障的作用机制。
　　方法：60只 Wistar雄性大鼠按体重随机区组分为正常对照组(NC)、模型组(MG)、植酸低剂量组（PL）、植酸中剂量组(PM)和植酸高剂量组(PH)。各植酸作用组每天分别给予0.25g/kg、0.5g/kg和1g/kg的植酸钠灌胃，NC和MG组灌胃等体积生理盐水。实验第5周起，除NC组外，其余各组大鼠颈背部注射剂量为30mg/kg的DMH持续18周，期间NC组注射等体积生理盐水。继续植酸钠灌胃至实验39周，处死大鼠。取 NC组结肠组织及其他组结直肠肿瘤，免疫组化的方法检测其zo-1和occludin蛋白的表达情况；Western Blot方法检测MUC2、TFF3和claudin-1蛋白的表达情况；实时定量PCR方法检测MUC2、TFF3和claudin-1 mRNA的表达情况；酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中D-乳酸（D-LA）和内毒素（LPS）的表达情况。
　　结果：实验结束时，模型组和植酸各剂量组均发生结直肠肿瘤，其中，模型组与植酸低剂量组肿瘤发生率均为100%，植酸中、高剂量组肿瘤发生率下降，分别为88.9%和66.7%；与对照组比较，模型组zo-1和occludin蛋白的表达明显降低（P＜0.05），植酸干预后，结直肠肿瘤中zo-1和occludin蛋白的表达显著升高（P＜0.05）；DMH诱导使得MUC2和TFF3蛋白表达明显降低（P＜0.05），claudin-1蛋白表达明显升高（P＜0.05），经植酸作用，各植酸组 MUC2蛋白表达均明显升高（P＜0.05），植酸中、高剂量组 TFF3的蛋白表达明显升高（P＜0.05），且植酸中、高剂量组claudin-1蛋白的表达显著降低（P＜0.05）；MUC2和claudin-1 mRNA表达水平的变化趋势与其对应的蛋白变化一致，而各植酸作用组 TFF3 mRNA的表达水平与模型组相比均明显升高（P＜0.05）。与对照组相比，模型组大鼠血清中D-LA和LPS的表达明显升高（P＜0.05），各植酸作用组显著降低 D-LA和 LPS的表达（P＜0.05）。
　　结论：（1）.植酸可以改善 DMH诱导的肠粘膜损伤，保护肠粘膜机械屏障，减少DMH诱导的大鼠结直肠肿瘤的发生率。
　　（2）植酸通过上调肠粘膜粘液层中MUC2和TFF3蛋白及mRNA的表达水平来改善粘液层的屏障功能；植酸可以上调肠粘膜紧密连接蛋白zo-1、occludin的水平，并下调claudin-1的水平，进而调节肠上皮细胞的连接功能；植酸下调了血清中D-LA和LPS的水平，减少机体遭受侵袭及移位的可能。

目录

引言

第一章 材料与方法

1.1 实验动物

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

1.4 试剂配制

1.5 动物分组

1.6 结直肠癌模型建立

1.7 病理组织学观察

1.8 Western-blot 方法检测MUC2、TFF3和Claudin-1蛋白的表达

1.9 免疫组织化学方法检测zo-1和occludin蛋白的表达

1.10 实时定量PCR 方法检测MUC2、TFF3和Claudin-1 mRNA的表达

1.11 ELISA法检测大鼠血清中D-乳酸和内毒素的含量

1.12 数据处理

第二章 结果

2.1 各组大鼠肿瘤发生情况

2.2 各组大鼠结肠病理形态学观察

2.3 Western Blot 方法检测植酸对正常结肠组织和结直肠肿瘤组织MUC2、TFF3和Claudin-1蛋白表达的影响

2.4 免疫组化法检测植酸对正常结肠组织和结直肠肿瘤组织的 zo-1和occludin 蛋白表达的影响

2.5 实时定量 PCR 方法检测植酸对正常结肠组织和结直肠肿瘤组织MUC2、TFF3和Claudin-1 mRNA表达的影响

2.6 ELISA法检测植酸对各组大鼠血清中的D-LA和LPS水平的影响

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献

综述:肠道粘膜屏障及饮食对其影响的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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