槐耳清膏对人早幼粒白血病HL-60细胞株增殖与凋亡的影响研究

摘要

目的：探讨不同浓度的槐耳清膏对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞株的增殖、凋亡的影响。
　　方法：将人早幼粒白血病细胞株HL-60培养至对数生长期，以不同浓度槐耳清膏（0mg/ml、2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml、16mg/ml）分别培养HL-60细胞24h，48h和72h，0mg/ml为对照组，2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml、16mg/ml为实验组，收集各分组的细胞，台盼蓝染色后进行细胞计数初步判读槐耳清膏对HL-60细胞增殖的影响；采用CCK-8细胞增殖活性检测法检测上述浓度槐耳清膏培养细胞24h，48h和72h后的吸光度，分析槐耳清膏对HL-60细胞的增殖抑制作用；应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测分析槐耳清膏对HL-60细胞凋亡的影响。
　　结果：1.在倒置显微镜下观察加入槐耳清膏培养48h后，发现随着药物浓度的升高，作用时间的延长，HL-60细胞形态发生变化，细胞密度下降，折光性减低，胞体变小，细胞皱缩、破裂。
　　2.通过细胞计数方法，不同浓度的槐耳清膏（2、4、8和16 mg/ml）分别作用于HL-60细胞24h、48h和72h后，实验组除2mg/ml组在48小时外，其余各槐耳清膏浓度组HL-60细胞数在各个时间均较对照组相应时间的细胞数减少，变化具有统计学差异（P＜0.05）。
　　3. CCK-8增殖活性检测实验结果显示，不同浓度的槐耳清膏（2、4、8和16 mg/ml），对HL-60细胞的抑制率与阴性对照组相比，均有显著性差异（P＜0.001）。在一定浓度范围内(2-8mg/ml)，随着药物浓度的增加，作用时间的延长，抑制率明显升高。16mg/ml槐耳清膏组48小时与72小时的抑制率相比，结果没有统计学意义（P＞0.05）。
　　4. Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析研究槐耳清膏对HL-60细胞诱导凋亡的结果显示，不同浓度（2、4、8和16 mg/ml）的槐耳清膏分别作用于HL-60细胞24h，48h和72h，细胞凋亡率高于对照组，有统计学意义（P＜0.01）。培养时间在24h和48h时间点，细胞凋亡率随着药物浓度的增加，凋亡率逐渐升高。当培养时间达到72小时，各不同浓度实验组凋亡率与对照组相比，细胞凋亡率均增加，统计学有差异；但各不同浓度组实验组之间两两比较，结果均无统计学差异（P=0.0784）
　　结论：1.不同浓度的槐耳清膏（2、4、8和16 mg/ml），可抑制HL-60细胞增殖，在一定浓度范围内(2-8mg/ml)，随着药物浓度的增加，作用时间的延长，抑制率逐渐升高。
　　2.不同浓度槐耳清膏（2、4、8和16 mg/ml）对HL-60细胞有诱导凋亡作用，低浓度组（2mg/ml和4mg/ml）随着时间的延长，凋亡率呈线性升高。高浓度组（8mg/ml和16mg/ml），其48小时的细胞凋亡率较24小时的凋亡率明显升高，72小时的凋亡率较48小时组下降。
　　3.槐耳清膏可在体外抑制HL-60细胞的增殖，并促进其凋亡。

目录

引言

材料与方法

1 实验材料

1.1细胞株和药物

1.2 实验试剂

1.3 实验设备和仪器

1.4 实验试剂的配制和保存

2 实验方法及步骤

2.1 细胞复苏、培养、冻存

2.2 细胞计数法检测槐耳清膏对HL-60细胞增殖的影响

2.3 CCK-8法测定槐耳清膏对HL-60细胞的生长抑制率

2.4 流式细胞术检测槐耳清膏对HL-60细胞凋亡的影响

3 统计学处理

结果

1 槐耳清膏对HL-60细胞形态学上的的影响

2细胞计数法检测槐耳清膏对HL-60细胞增殖的影响

3 CCK-8法检测槐耳清膏对HL-60细胞的生长抑制作用

3.1 槐耳清对于HL-60细胞抑制率的影响

3.2 相同培养时间下不同浓度槐耳清膏对HL-60细胞的抑制率

3.3 相同浓度槐耳清膏不同培养时间HL-60细胞的抑制率

4 流式细胞术检测槐耳清膏对HL-60细胞凋亡的影响

4.1槐耳清膏对HL-60细胞凋亡率的影响

4.2 相同培养时间下不同浓度槐耳清膏HL-60细胞的凋亡率

4.3 相同浓度槐耳清膏不同培养时间HL-60细胞的凋亡率

讨论

结论

参考文献

综述：槐耳的抗肿瘤作用研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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