沙蜇毒素致红细胞损伤的机制初步探究

摘要

研究目的:
　　研究沙蜇毒素致红细胞损伤（溶血活性）的机制，评估不同浓度的维生素C对沙蜇毒素溶血活性的影响。
　　研究方法:
　　采用沙蜇自溶法，从沙蜇中分离刺丝囊细胞，利用超声波细胞破碎法提取刺丝囊细胞中的毒素，以牛血清白蛋白为标准，测得毒素蛋白的浓度。选取健康自愿者，男女各8名，各抽取新鲜血3～4ml，重复洗涤红细胞2~3次后，配制成20%（V/V）人血红细胞悬浮液和0.45%（V/V）人血红细胞悬浮液。取不同体积的沙蜇毒素加入到1ml的20%人血红细胞悬浮液中，加0.9%的氯化钠溶液稀释至5ml，使得沙蜇毒素终浓度为0、2、4、8、16μg/ml，应用硫代巴比妥（TBA）法，检测不同浓度的沙蜇毒素作用后，溶血反应体系当中的脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的水平。取一定体积的沙蜇毒素，加入到1ml的0.45%人血红细胞悬浮液中，后加入不同体积的维生素C，再加入0.9%的氯化钠溶液稀释至5ml，使维生素C终浓度分别0、0.5、1、1.5、2、2.5mmol/L，测定不同浓度的维生素C对沙蜇毒素溶血活性的影响。
　　结果:
　　实验数据所得，本研究中沙蜇毒素蛋白浓度为395.45μg/ml。不同浓度的沙蜇毒素作用后，红细胞溶血体系中的 MDA水平随毒素剂量增大呈依赖性升高，实验中沙蜇毒素浓度为16μg/ml时，MDA浓度由基础浓度（0.79±0.07μmol/L）升高至（19.90±1.22μmol/L），采用单因素方差分析及LSD-t检验，实验各组与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；实验各组互相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。所研究浓度范围内的维生素C可以拮抗沙蜇毒素的溶血活性，随着维生素C浓度的升高，溶血活性不断下降。当维生素C浓度在0~1mmol/L范围内，毒素的溶血活性下降明显，由75.79%（未添加维生素C）显著下降至31.95%；当维生素C浓度在1~2.5mmol/L范围内，溶血活性由31.95%下降至26.66%，下降趋势减慢。采用单因素方差分析及LSD-t检验，实验各组与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）；实验各组互相比较，当实验中维生素C浓度为1.5、2、2.5mmol/L时，差异无统计学意义（P＞0.05），其余各组差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论:
　　脂质过氧化损伤是沙蜇毒素溶血活性的机制之一，有其他机制参与了溶血过程。维生素C能够一定程度上抑制沙蜇毒素的溶血活性，可以作为预防和治疗沙蜇蜇伤的候选药物。沙蜇毒素中存在对红细胞产生脂质过氧化损伤的成分，为沙蜇毒素中溶血蛋白的提纯提供了实验帮助。
　　意义了解沙蜇毒素致红细胞损伤的机理，为沙蜇蜇伤的预防和治疗提供实验依据，为深入研究沙蜇毒素中各类生物活性物质提供基础资料。

目录

引言

材料与方法

1材料

2沙蜇刺丝囊细胞的制备

3沙蜇刺丝囊毒素的提取

4蛋白浓度测定

5人血红细胞悬浮液的制备

6丙二醛（MDA）检测工作液准备

7沙蜇毒素对人血红细胞脂质过氧化损伤效应的检测

8维生素C对沙蜇毒素溶血活性的影响

9统计学处理

结果

1蛋白浓度测定的标准曲线绘制

2沙蜇毒素蛋白浓度测定

3 MDA浓度测定的标准曲线绘制

4沙蜇毒素对红细胞的脂质过氧化损伤效应

5维生素C对沙蜇溶血活性的影响

讨论

结论

参考文献

综述:刺胞动物毒素生物活性的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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