白藜芦醇对异烟肼联合利福平所致大鼠肝损伤保护作用及其机制的研究

摘要

目的： 白藜芦醇是一种多酚类化合物，主要来源于葡萄、桑葚、虎杖等植物，具有抗氧化、抗炎、抗突变等生物学作用。有关研究表明白藜芦醇对人类许多疾病有着很好的辅助治疗作用，对酒精肝损伤及自身免疫性肝炎均具有一定的保护作用，但目前关于其对抗结核药物所致肝损伤方面的研究却鲜见报道。因此，本研究通过建立异烟肼联合利福平所致肝损伤大鼠模型，观察不同剂量白藜芦醇对肝损伤大鼠有无保护作用,初步观察其保护机制是否与抗氧化、抗炎、以及脂质代谢过程中关键基因和蛋白的表达有关。 方法： 实验动物选用60只SPF级雄性Wistar大鼠，体重180~220g，按体重随机分为5组：正常对照组（Control）、模型组（Model）、白藜芦醇低剂量干预组（RLDG）、白藜芦醇中剂量干预组（RMDG）、白藜芦醇高剂量干预组（RHDG）。白藜芦醇低、中、高干预组每天分别空腹灌胃给予25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg白藜芦醇，对照组和模型组灌胃给予等剂量0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），2h后模型组和白藜芦醇干预组每天灌胃给予异烟肼（100mg/kg）＋利福平（150mg/kg），对照组给予等剂量溶剂灌胃，连续灌胃28天。末次灌胃12h后,称重，3%的戊巴比妥钠麻醉大鼠，腹主动脉取血，分离血清、血浆,迅速摘取肝、脾、肾脏组织，计算脏器指数。HE染色观察大鼠肝脏组织病理学改变。全自动生化分析仪检测大鼠血清肝功能及脂质代谢指标。大鼠肝脏组织匀浆超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）活性采用黄嘌呤氧化酶法检测；丙二醛（Malonaldehyde,MDA）含量采用硫代巴比妥酸法测定；肝还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量和谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）活性采用二硫代硝基苯甲酸比色法测定；比色法检测过氧化氢酶（Catalase,CAT）活性。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素4(Interleukin-4,IL-4)和细胞因子白介素-10（(Interleukin-10,IL-10）的水平。实时定量PCR法检测大鼠PPAR-αmRNA和PPAR-γmRNA的表达水平。Western-blot法检测肝脏PPAR-α和PPAR-γ蛋白表达水平。 结果： 1.与正常对照组大鼠相比，模型组及白藜芦醇各剂量组大鼠的体重明显下降，肝脏指数明显升高。模型组大鼠血清总胆汁酸（TBA）、直接胆红素（DBIL）、总胆红素（TBIL）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）水平显著升高（P＜0.01）。白藜芦醇干预后可显著抑制血清ALT、AST、DBIL、TBIL水平的升高。HE染色结果显示，模型组大鼠出现严重的脂肪变性及炎性细胞浸润，白藜芦醇干预后脂肪变性、炎性细胞浸润均得到明显改善。 2.脂质代谢水平检测结果显示，模型组大鼠血清CHOL、TG和肝脏CHOL水平显著升高，而白藜芦醇干预后抑制了异烟肼联合利福平引起的血清CHOL、TG水平的升高。与正常对照组比较，模型组的PPAR-α和PPAR-γmRNA以及蛋白表达水平均明显降低（P＜0.05）；白藜芦醇干预后明显上调了PPAR-α和PPAR-γmRNA以及蛋白表达水平。 3.模型组的肝匀浆GSH水平有所下降，白藜芦醇低、高剂量组能显著升高GSH水平（P＜0.05）。模型组的肝匀浆GSH-Px和CAT活性都显著下降，白藜芦醇中剂量组肝匀浆GSH-Px和CAT活性与模型组比较分别升高了20.6%和53.23%（P＜0.05）。 4.与正常对照组相比，模型组血清TNF-α水平明显升高（P＜0.05），而IL-10水平显著降低（P＜0.05）；与模型组相比，白藜芦醇低中高剂量组血清TNF-α水平均显著降低，分别下降18.7%、15.5%和28.6%（P＜0.05）；白藜芦醇中、高剂量组血清IL-10水平较模型组比较显著升高（P＜0.05）。 结论： 1.白藜芦醇对异烟肼联合利福平所致肝损伤大鼠具有一定的保护作用。 2.白藜芦醇的肝脏保护作用机制可能与①提高抗氧化酶活性；②减少促炎细胞因子TNF-α等释放；③调节脂质代谢水平；④上调PPAR-α、PPAR-γ蛋白表达有关。

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