过表达MIIP基因对HCMV感染的U87细胞特性的影响

摘要

目的： 1.利用人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染神经胶质瘤细胞U87，检测细胞迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)表达量的变化，从而探讨HCMV感染对U87细胞的影响。 2.通过检测迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因及其蛋白表达水平的增减，结合细胞增殖、侵袭及迁移水平的波动，探讨HCMV和神经胶质瘤的发生发展之间的相关性及科学意义。 方法： 1.HCMV AD169(MOI为5)感染神经胶质瘤细胞U87，利用相差显微镜观察U87细胞在未感染和感染后6h、12h、24h、48h的形态学特征变化。 2.用过表达的MIIP基因慢病毒感染HCMV阳性的U87细胞作为实验组，同时将仅感染HCMV的U87细胞作为对照组，由空载体CMV4转染的HCMV感染的U87细胞作为空质粒组。分别收集细胞用Western-blot检测MIIP编码蛋白的表达量的变化。 3.用CCK-8法检测神经胶质瘤细胞U87的增殖活性的情况。 4.用Transwell体外迁移实验检测实验组、空质粒组和对照组的细胞迁移能力。 5.用Transwell体外侵袭实验和划痕实验检测实验组、空质粒组和对照组的细胞侵袭力。 结果： 1.HCMV感染U87细胞后，细胞形态有明显的变化。 2.Western-blot检测表明实验组(U87+HCMV/MIIP组)细胞的MIIP蛋白表达量较空质粒组(U87+HCMV/CMV4组)和对照组(U87+HCMV组)相比明显上调(P＜0.01)。 3.CCK-8检测表明对照组细胞的增殖能力明显强于实验组(P＜0.01)。 4.Transwell体外迁移检测表明，与空质粒组、对照组相比，实验组细胞发生迁移的总数明显减少，实验组细胞的迁移能力明显弱于空质粒组和对照组(P＜0.01)。 5.Transwell体外侵袭实验检测表明较空质粒组和对照组，实验组发生侵袭的细胞显著少于空质粒组和对照组，实验组细胞的侵袭力明显减弱，且细胞数显著下调(P＜0.01)；划痕实验显示实验组迁移能力显著降低(P＜0.01)。 结论： 人巨细胞病毒（HCMV）人群中的感染率极高，病毒能够出现激活状态和潜伏状态交替出现的情况，潜伏感染的病毒因基因转录被抑制不能产生并释放新的病毒颗粒，而病毒激活状态下可产生释放新的病毒颗粒,HCMV的激活受到各种转录因子及细胞因子等多种因素的作用HCMV感染与多种肿瘤潜在关系，MIIP基因是新发现的抑癌基因，其表达缺失时易出现细胞有丝分裂失控，肿瘤细胞易形成并易发生迁移及侵袭。本实验过表达MIIP基因后观察HCMV感染的神经胶质瘤U87细胞迁徙能力、增殖能力、侵袭能力等特性的改变，得出初步结论如下： 1、HCMV感染的U87细胞的增殖活性受到过表达MIIP基因的抑制； 2、HCMV感染的U87细胞的迁移能力在MIIP基因过表达后减弱； 3、MIIP基因过表达后HCMV感染的U87细胞的侵袭能力受到抑制。