宁夏地区牛结核病的分子流行病学调查

摘要

目的：分离培养并鉴定牛源分枝杆菌；对分离获得的结核分枝杆菌复合群菌株进行基因多态性研究，从分子流行病学角度分析宁夏地区牛结核病流行特点；对非结核分枝杆菌亲缘关系进行研究，初步了解非结核分枝杆菌在本地奶牛中的流行情况。
　　 方法：采集牛鼻拭子和牛咽拭子，对其进行处理，以罗氏培养法分离培养临床牛源分枝杆菌，并应用PCR方法做进一步鉴定；采用基于PCR的VNTR分型方法，对结核分枝杆菌复合群临床分离株进行多态性研究；采用ERIC方法对非结核分枝杆菌亲缘关系进行研究。
　　 结果：
　　 1.对2040份临床鼻拭子和咽拭子常规处理后，利用罗氏培养法对牛结核病病原菌进行分离培养，应用PCR方法对形态学及涂片染色呈阳性的细菌进行鉴定。共获得结核分枝杆菌复合群菌株(MTC)27株，非结核分枝杆菌34株。27株MTC中，25株为宁夏分离株(14株为牛分枝杆菌，11株为结核分枝杆菌)，2株是新疆分离株(2株均为牛分枝杆菌)。
　　 2.采用VNTR基因分型方法，对7株东北地区临床株、本实验室分离培养的25株宁夏地区临床株和2株新疆地区临床株进行基因多态性研究。在相似系数90％的水平上，得到26个基因型，其中包含8个簇(每2株一簇)和18个独特基因型。相似系数80％的水平上形成10个簇，3个独特基因型，最大一簇包含7株菌。
　　 3.基因分型结果表明，存在养殖场的奶牛结核病流行情况，但没有场爆发性流行情况。宁夏地区分离的11株结核分枝杆菌中，1株为北京基因型；6株东北地区结核分枝杆菌中，3株为北京基因型。以上数据表明，宁夏和东北地区均存在北京基因型菌株的感染情况。由于尚未有关于牛源北京基因型菌株的报道，因此认为本实验中所研究的4株北京基因型株可能是由人传染给牛。某些不同养殖场的菌株间相似系数达到了90％以上，可能这些场间存在奶牛相互引进时造成结核病的传染。在相似系数80％的水平上，最大1簇包含的7株牛分枝杆菌，来自6个养殖场，因此认为该基因型牛分枝杆菌菌株可能是宁夏牛分枝杆菌流行株；国内外数据比对结果显示，宁夏分离株和国内、国际数据库的菌株相似度较低。
　　 4.采用ERIC-PCR方法，对34株非结核分枝杆菌临床分离株的亲缘关系进行研究，通过聚类分析图可知在75％的分类水平上，将34株非结核分枝杆菌分成11组，9组成簇，2组独立，最多的2个簇各包含7株菌。对两个大簇菌株来源进行分析，簇1菌株分离自JT场、HN场、HG场；簇2菌株HS场、QL场、JT场。因此认为以上两簇所对应的菌可能为易感染奶牛的非结核分枝杆菌。

目录

文摘

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论文说明：缩写词与中英文对照

声明

第一章 引言

1.1结核分枝杆菌复合群引起的牛结核病

1.2非结核分枝杆菌引起的牛结核病

第二章 牛结核病病原菌的分离培养及鉴定

2.1材料与方法

2.2结果

2.3讨论与分析

2.4小结

第三章 结核分枝杆菌复合群的基因分型研究

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3实验结果

3.4讨论与分析

3.5小结

第四章 非结核分枝杆菌亲缘关系的研究

4.1实验材料

4.2实验步骤

4.3实验结果

4.4讨论与分析

4.5小结

第五章 结论

参考文献

致 谢

作者简历

附 录