葡萄卷叶病毒-3检测技术与脱除方法研究

摘要

葡萄卷叶病(Grapevine leafroll disease)是葡萄上一种重要的病毒病，现已研究表明引起该病的病原不止一种，目前国际上承认的已有11种，其中葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)是最主要的一种。进行病毒脱毒处理、推广无毒化栽培对我国葡萄产业的健康发展具有重要意义。本研究以优良的酿酒葡萄品种蛇龙珠病株为材料，对GLRaV-3检测技术和脱除方法进行了研究。主要研究结果如下：
　　 1.通过对GLRaV-3DAS-ELISA和RT-PCR检测方法的优化，建立了GLRaV-3检测技术体系。
　　 2.对比研究了GLRaV-3 DAS-ELISA和RT-PCR两种检测方法的检测效果。研究结果表明，针对同一感病材料，利用RT-PCR在试验所设的第一次检测时间(6月份)就能检测到该病毒，而DAS-ELISA直到试验所设的第二次检测时间(7月份)才能检测到该病毒，确定RT-PCR法检测的灵敏度高于DAS-ELISA。
　　 3.利用半定量RT-PCR法对比研究了不同部位、不同检测时间对GLRaV-3检测结果灵敏度的影响。研究结果表明，不同部位之间检测灵敏度大小排序为：韧皮部>叶柄>叶片；不同检测时间灵敏度大小排序为：9月>8月>7月>6月。
　　 4.通过对葡萄组织培养过程中培养条件的优化，确定透光、透气性好的封口膜更适于葡萄组织培养容器的封口。在同等培养条件下，健康试管苗的生长势明显优于带毒试管苗，带GLRaV-3的植株生根迟，生长缓慢。
　　 5.对比研究了茎尖培养与热处理结合茎尖培养两种脱毒方法对GLRaV-3的脱除效果。研究结果表明，当茎尖大小为0.2-0.5 mm时，茎尖成活率为40%，茎尖培养脱毒率为30%，有效脱毒率为12%，热处理结合茎尖培养脱毒率为90%，有效脱毒率为36%，茎尖大小为0.8-1.0mm时，茎尖成活率为93.3%，茎尖培养脱毒率为10%，有效脱毒率为9.3%，热处理结合茎尖培养脱毒率为60%，有效脱毒率为56%。热处理结合茎尖培养的脱毒效果明显高于茎尖培养。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

第一章 引言

1.1 葡萄卷叶病研究进展

1.2 葡萄病毒病脱除方法研究进展

1.3 葡萄病毒病检测技术研究

1.4 研究目的及意义

第二章 葡萄卷叶病毒-3检测技术研究

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果与分析

2.4 讨论

第三章 葡萄组织培养体系的优化

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果与分析

3.4 讨论

第四章 葡萄卷叶病毒-3脱除方法研究

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果与分析

4.4 讨论

第五章 结论

5.1 葡萄卷叶病毒-3检测技术

5.2 葡萄组织培养体系优化

5.3 葡萄卷叶病毒-3脱除方法

参考文献

致谢

附录

附图

作者简介