苜蓿假盘菌(Pseudopeziza medicaginis(Lib.)Sacc.)侵染苜蓿叶片的差异蛋白质组学初步研究

摘要

苜蓿(Medicago sativa.L)因其蛋白质种类丰富、蛋白质含量高，而成为重要的蛋白质饲料资源。由苜蓿假盘菌(Pseudopeziza medicaginis(Lib.) Sacc.)引起的苜蓿褐斑病是苜蓿产业的主要病害之一，植株感病后引起苜蓿减产、品质下降等，影响家畜消化率，产生的香豆雌酚会降低雌性家畜的繁殖力。因此，研究苜蓿假盘菌的侵染机制对合理控制病害、实现苜蓿产业的可持续发展具有重要意义。
　　前人对苜蓿褐斑病的田间病情调查、病原菌鉴定和抗性品种筛选、细胞学以及苜蓿抗性基因的ISSR等进行了深入而系统的研究，而关于苜蓿假盘菌侵染苜蓿叶片的蛋白质组学研究鲜有报道。为了从蛋白质角度解析苜蓿假盘菌的侵染机制，本文对苜蓿假盘菌侵染苜蓿叶片的差异蛋白质进行了初步研究，研究结果如下:
　　(1)田间发病情况调查表明:种植年限对苜蓿褐斑病的发生和病情的严重情况具有一定影响，随种植年限的增长，莒蓿褐斑病田间发病情况加重;光合测定表明:苜蓿假盘菌的侵染影响叶片光合作用，健康叶片的光合速率和气孔导度是感病叶片的4倍，健康叶片的蒸腾速率是感病叶片的2倍。
　　(2)P.medicaginis侵染对叶片氧化还原系统的影响研究表明:苜蓿感病后，氧化还原酶类活性及细胞内活性氧、丙二醛(MDA)的含量均发生变化，使得氧化还原系统的功能增强，表明苜蓿假盘菌的侵染诱导苜蓿叶片的抗病活动增强。
　　(3)P.medicaginis侵染对叶片差异蛋白质的影响研究发现:苜蓿假盘菌侵染12h、24h、36h后与健康叶片比较共有57个差异蛋白质点，其中33个上调点，24个下调点。紫花苜蓿(Medicagosativa.数据库成功鉴定到28个蛋白质点，皮盘菌科(Helotiales)数据库成功鉴定到21个蛋白质点。鉴定成功的差异蛋白质主要参与苜蓿的光合作用、活性氧清除、能量代谢、三羧酸循环等过程，说明苜蓿假盘菌侵染在不同程度上影响苜蓿叶片的光合作用、氧化还原系统。

目录

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论文说明

摘要

第一章 绪论

1．1 苜蓿褐斑病研究进展

1．1．1 苜蓿褐斑病的发生与危害

1．1．2 假盘菌(P．medicaginis)生物学特性研究

1．1．3 假盘菌(P．medicaginis)的侵染特性研究

1．1．4 抗性材料的鉴定筛选及分子生物学研究

1．2 植物病原真菌-寄主互作研究进展

1．2．1 植物与病原真菌互作机制

1．2．2 植物与病原真菌互作过程中的蛋白质组学研究

1．2．3 植物与病原真菌互作过程中的协同进化

1．3 植物蛋白质组学研究进展

1．3．1 主要蛋白质组学研究方法

1．3．2 植物蛋白质组学研究进展

1．3．3 苜蓿蛋白质组学研究进展

1．4 本研究的目的和意义

1．4．1 主要研究内容

1．4．2 研究目的和意义

第二章 试验材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 供试菌种

2．1．2 供试苜蓿

2．2 主要试验试剂与仪器

2．2．1 主要试验试剂

2．2．2 主要试验仪器

2．3 试验方法

2．3．1 田间调查方法

2．3．2 假盘菌(P．medicaginis)分离培养接种方法

2．3．3 氧化还原酶活性测定方法

2．3．4 活性氧测定方法

2．3．5 丙二醛(MDA)含量的测定方法

2．3．6 差异蛋白质组研究方法

2．4 数据处理

第三章 研究结果

3．1 田间调查结果

3．1．1 不同种植年限苜蓿地褐斑病发病情况调查

3．1．2 假盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片光合速率的影响

3．2 假盘菌(P．medicaginis)的分离培养接种研究结果

3．2．1 代间产孢时间

3．2．2 苜蓿褐斑病子实体镜检

3．2．3 假盘菌(P．medicaginis)不侵染时期叶片镜检

3．3 假盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片氧化还原系统影响结果

3．3．1 假盘菌(P．medicaginis)侵染对氧化还原酶的影响

3．3．2 假盘菌(P．medicaginis)侵染对活性氧的影响

3．3．3 假盘菌(P．medicaginis)侵染对MDA的影响

3．4 假盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片差异蛋白质的影响结果

3．4．1 假盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片总蛋白的影响

3．4．2 不同侵染时期叶片蛋白质2D电泳研究

3．4．3 不同侵染时期叶片差异蛋白质含量变化

3．4．4 不同侵染时期叶片差异蛋白质NCBI数据库检索结果

3．4．5 差异蛋白质可信肽段

第四章 分析与讨论

4．1 田间调查分析与讨论

4．1．1 不同种植年限苜蓿地苜蓿褐斑病病情分析与讨论

4．1．2 假盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片光合作用的影响分析与讨论

4．2 假盘菌(P．medicaginis)分离培养接种研究分析与讨论

4．3 假盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片氧化还原系统影响分析与讨论

4．3．1 假盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片氧化还原酶的影响研究分析与讨论

4．3．2 假盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片活性氧及MDA影响分析与讨论

4．4 假盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片差异蛋白质影响研究分析与讨论

4．4．1 段盘菌(P．medicaginis)侵染对叶片总蛋白影响研究分析与讨论

4．4．2 不同侵染时期叶片差异蛋白质含量变化及功能鉴定研究分析与讨论

第五章 结论与展望

参考文献

致谢

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