内蒙古豹蛛属蜘蛛的分子生物学研究(蜘蛛目：狼蛛科)

摘要

采用DNA测序方法首次对内蒙古豹蛛属(Pardosa)7种蜘蛛的线粒体12s rRNA基因部分序列进行了测定，并以网上下载的狼蛛科獾蛛属的武昌獾蛛(Trochosa wuchangensis)及自测的大腹园蛛(Araneusventricosus)作为外类群，使用Mega4.0软件分析，并用N-J、MP、ME法构建分子系统树，获得如下结论：
　　 1.用引物12St-L-14503(5'-GGTGGCATTTTATTTTATTAGAGC-3')、12Sbi-H-14214(5'-AAGAGCGACGGGCGGGCGATGTGT-3')进行PCR扩增和测序，电泳后得到300bp左右的条带。
　　 2.测序所得豹蛛属7种蜘蛛12s rRNA基因序列平均长度为263bp，其平均碱基组成分别为：A：44.2％、T：36.7％、C：9.3％、G：9.6％，A、T含量明显高于G、C含量。
　　 3.对所测序列进行比对分析后，序列中变异位点是45个，简约信息位点是218个，变异率为17.0％，说明12s rRNA基因序列是保守序列，适用于物种的系统发育研究。
　　 4.不同序列问的转换加颠换值最高为21，最低为4，颠换的发生主要以T-A，A-T为主,转换主要以C-T，T-C为主。
　　 5.不同方法构建的系统树基本一致，7个种分为3支：即拉普兰豹蛛组、蒙古豹蛛组、山栖豹蛛组，与尹长民《中国狼蛛》根据形态解剖得出的结论相一致。
　　 6.在蜘蛛目中属间的遗传多样性研究中，12s rRNA基因可以作为良好的分子标记予以应用。
　　 7.采用SDS法提取-20℃冷冻保存蜘蛛标本总DNA是便于操作且效果理想的提取方法。
　　 8.乙醇浸泡标本的DNA在短期内的降解与时间梯度无关。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

1前言

1.1豹蛛属蜘蛛研究概况

1.1.1豹蛛属蜘蛛传统分类研究概况

1.1.2豹蛛属蜘蛛分子方法研究概况

1.1.3豹蛛属蜘蛛主要形态特征

1.2遗传多样性与分子系统学研究的理论基础与方法

1.2.1遗传多样性概念与方法

1.2.2分子系统学研究的理论基础及方法

1.3用于蜘蛛分子系统学研究的主要分子标记技术及基因

1.3.1进化动力-基因突变

1.3.2主要的分子标记技术原理及应用

1.3.3用于蜘蛛分子系统学研究的主要基因

2材料与方法

2.1实验材料

2.2.实验试剂及仪器设备

2.2.1试剂及药品

2.2.2仪器设备

2.3.实验方法

2.3.1总DNA提取

2.3.2样品DNA的检测

2.3.3基因部分序列扩增

2.3.4 12s rRNA基因片段扩增产物的叫收和测序

2.3.5 12s rRNA基因片段序列数据分析

3结果与分析

3.1乙醇浸泡标本蜘蛛总DNA的降解

3.2不同方式保存的蜘蛛基因组DNA提取方法的探索

3.2.1材料

3.2.2方法

3.3豹蛛属蜘蛛总DNA提取

3.4 PCR扩增

3.5 PCR产物测序

3.6 12s rRNA基因序列分析

3.7豹蛛属不同种间的遗传距离

3.8豹蛛属不同种间的遗传多样性

4讨论与小结

4.1实验过程

4.2序列分析

4.3豹蛛属蜘蛛不同种间遗传多样性分析

4.3.1建树方法

4.3.2遗传多样性分析

4.4小结

4.5本论文创新之处与研究的不足

参考文献

附表

附图

攻读硕士期间发表论文情况

致谢