辽细辛非挥发性化学成分、质量控制和抗菌活性研究

摘要

细辛为马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoides Fr.var.mandshuricum(Maxim.)Kitaga.、汉城细辛 Asarum sieboldii Mip.var.seoulense Nakai或华细辛 Asarum rieboldii Mip.的根及根茎,前两种习称辽细辛[1],是我国传统中药材,收载于《中国药典》2005年版一部,具有祛风散寒、通窍止痛、温肺化饮的功能,用于治疗风寒感冒、头痛鼻塞、风湿痹痛、痰饮喘咳等症[2]。本研究以辽细辛为研究对象,收集了12个不同产地的辽细辛样品,并对其进行化学成分、抑菌活性和含量测定方法的研究。
　　 采用硅胶柱层析、凝胶柱层析以及半制备液相等多种色谱分离技术,结合反复重结晶等分离手段,对辽细辛经70％乙醇回流提取后的氯仿层进行了分离纯化,得到了4个化合物。通过理化性质和波谱分析并结合文献数据确定了其中3个化合物的结构,分别为:L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇。
　　 采用纸片法和96孔板法,考察了辽细辛中L-细辛脂素、L-芝麻脂素、卡枯醇、胡萝卜甘和β-谷甾醇对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌的抑菌活性,分别测定了此五种化合物对大肠杆菌等五种细菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:L-细辛脂素、L-芝麻脂素、卡枯醇、β-谷甾醇对五种细菌均具有较强的抑菌活性,胡萝卜甘没有抑菌活性。本研究所采用的96孔板法用药量少,结果易于观察,为辽细辛化学成分药效学的研究提供了参考。
　　 建立了同时测定辽细辛中L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇含量的反相高效液相色谱分析方法,以Diamonsil C15为色谱柱,流动相为乙腈.水溶液,等度洗脱,检测波长为230 nm。L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇分别在3.50-35.0μg·mL-1(r=0.9997),1.52-76.0μg·mL-1(r=0.9992)和0.38-7.60μg·mL-1(r=0.9999)范围内呈良好线性关系,回收率分别为99.7％(RSD=2.7％),96.7％(RSD=1.9％)和97.7％(RSD=1.5％)。结果表明,本方法简便可靠,重复性好,为辽细辛的质量控制提供了方法。采用正交实验设计,对辽细辛提取工艺进行了优化,辽细辛中L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇的最佳提取工艺为:加入10倍量乙酸乙酯,超声提取3次,每次20 min。