鸡病毒性关节炎病毒分离株S1基因的克隆与序列分析及RT-PCR检测方法的研究

摘要

本试验将鸡病毒性关节炎病毒(AVAV)内蒙古、天津地区分离株(B-98，C-98，G-98，T-98株)经SPF鸡胚增殖活化，进行总RNA的提取。参考GeneBank中ARV-S1133株S1基因序列设计一对测序引物，一对诊断引物。应用测序引物进行RT-PCR特异性地扩增病毒的S1基因。将S1基因cDNA克隆到pGEM-TEasy载体后进行测序。测序结果表明所扩增的cDNA片段长1643个核苷酸，包含了完整的S1基因的三个开放阅读框架(ORF1，ORF2和ORF3)和基因两端的非编码区，ORF1，ORF2和0RF3分别编码P10、P17和σ3蛋白。核苷酸序列比较分析结果表明：4株AVAV分离株之间在P10和P17蛋白基因上均没有核苷酸差异，在σ3蛋白基因上也只存在3个核苷酸差异；4株AVAV分离株与其它参考毒株除ARV-138和纳尔逊海湾病毒(NelsonBayVirus，NBV)外，同源性都在95％以上。表明，鸡病毒性关节炎病毒我国分离株在S1基因上与参考毒株有很大的相关性。应用诊断引物一步法RT-PCR扩增病毒RNA，以建立RT-PCR诊断方法，同时检测其特异性和敏感性。特异性试验和敏感性试验结果表明，所建立的一步法RT-PCR方法可以检测到经鸡胚增殖的病毒标准株ARV-S1133及地方分离株(B-98，C-98，G-98，T-98)的核酸，在琼脂糖凝胶电泳中出现了与预期大小一致的435bp的DNA片段，而其他对照病原(NDV，IBDV，IBV，ILTV，EDS76V)的检测结果均为阴性；该RT-PCR的最低检测量为0.5ng的ARVRNA，说明此方法对于禽呼肠孤病毒的检测是特异、敏感的。

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英文文摘

论文说明：缩略词表

1引言

2材料与方法

3试验结果

4讨论

5结论

致谢

参考文献

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