阿拉善双峰驼乳乳铁蛋白的分离纯化及其抗菌活性研究

摘要

双峰驼乳中富含多种营养素外还含有许多生物活性成分，其中乳铁蛋白在食品配方和药物研究等方面均起着重要作用。本研究通过等电点沉淀、硫酸铵沉淀和凝胶层析等方法，从内蒙古阿拉善双峰驼乳中分离纯化乳铁蛋白，通过考马斯亮蓝方法测定不同分离纯化方法所获得的乳铁蛋白含量，并用SDS-PAGE电泳分析了其纯度和分子量。结果表明，通过两次硫酸铵沉淀．两次SephadexG-100柱层析分离得到纯度为91％的驼乳乳铁蛋白(CLF)。再经凝胶成像系统分析确定其分子量为81.42KD。 采用试管二倍稀释法测定了驼乳铁蛋白的抗菌活性，结果表明CLF对E.coli的最小抑菌浓度(MIC)为3mg/mL，对S.aureus的最小抑菌浓度为2mg/mL，且与溶菌酶联合应用，则能明显增强其抗菌作用。乳铁蛋白的抗菌活性还与其铁饱和度密切相关，随着铁饱和度的增加其抗菌活性明显下降。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)、尿素、硫酸铵在0～10mg/mL，乳糖和可溶性淀粉在0～4mg/mL，酪蛋白在0～1.2mg/mL的质量浓度范围内，对CLF的抗菌活性影响不大。而NaCl或KCl的浓度为25～100mmol/L，MgCl<,2>或CaCl<,2>的浓度为1.0～5.0mmol/L时，乳铁蛋白的抗菌活性则会明显降低。 不同热处理和不同pH值条件对乳铁蛋白的抗菌活性亦有显著影响：在一定的温度范围内，随着热处理温度的增加乳铁蛋白的抗菌活性明显下降，即经较低温度加热处理后CLF能很好的保持其活性；而经较高温度加热处理会使CLF变性并失去抗菌活性。不同pH条件下的抗菌试验结果表明，当pH值在7.5～8.0时CLF的抑菌效果最好。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引言

1.1驼乳研究概况

1.1.1骆驼的分布及数量变化

1.1.2骆驼的产乳性能及驼乳价值研究概况

1.1.3驼乳保护性蛋白的研究概况

1.2乳铁蛋白的研究概况

1.2.1乳铁蛋白的结构和来源

1.2.2乳铁蛋白的分离纯化研究概况

1.2.3乳铁蛋白生物活性研究概况

1.2.4乳铁蛋白的抗菌作用机制研究概况

1.2.5乳铁蛋白的开发和应用前景

1.3本研究的目的和意义

2实验部分

2.1实验材料

2.1.1药品与试剂

2.1.2仪器设备

2.1.3数据处理

2.2实验内容

2.2.1阿拉善双峰驼初乳乳铁蛋白的分离纯化

2.2.2阿拉善双峰驼乳铁蛋白的抗菌活性研究

3实验结果

3.1乳铁蛋白的粗提取结果

3.2凝胶层析纯化结果

3.3 SDS-PAGE电泳结果

3.4考马斯亮蓝法测定蛋白含量结果

3.5乳铁蛋白对E.COLI和S.AUREUS最小抑菌浓度的测定

3 6乳铁蛋白与溶菌酶的协同作用结果

3 7不同影响因素对乳铁蛋白抗菌活性的影响

3.7.1不同铁饱和度CLF对E.COLI的抗菌活性的影响

3.7.2不同碳源对CLF抗菌活性的影响

3.7.3不同氮源对CLF抗菌活性的影响

3.7.4离子强度对CLF抗菌活性的影响

3.7.5热处理对CLF抗菌活性的影响

3.7.6不同pH对CLF抑菌效果的影响

4小结与讨论

4.1内蒙古阿拉善双峰驼乳乳铁蛋白的分离纯化

4.2阿拉善双峰驼乳乳铁蛋白抗菌活性

5结论

致 谢

参考文献

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