LDL和PCS对羊精子冷冻效果及脂类含量的影响

摘要

由于山羊和绵羊的冷冻精液输精后受精率低于自然交配，在生产中还没有推广。山羊和绵羊冷冻精液受精率低的原因之一可能是在冷冻过程中精子的胆固醇流失，过早获能造成的。因此，本研究以绒山羊和内蒙古细毛羊为实验动物，用卵黄稀释液稀释精液，分析冷冻后精子中胆固醇和磷脂的变化，在此基础上，用低密度脂蛋白(LDL)代替卵黄，添加胆固醇硫酸脂(PCS)，研究在冷冻过程中LDL和PCS对精子胆固醇的保护作用及对精子的活力、膜完整率和项体完整率的影响，结果如下。 1.用卵黄稀释液进行山羊和绵羊精液冷冻保存，冷冻后，山羊和绵羊精子胆固醇含量分别从鲜精的230.33nmol/109精子下降到175.33和从234.54 nmol/109精子下降到163.76；山羊和绵羊精子的磷脂含量在鲜精和冷冻-解冻后分别为443.33、461.66和431.61、449.18nmol/109精子;山羊和绵羊精子胆固醇与磷脂的比例(c/p)分别从鲜精的0.5211和0.54下降到冷冻一解冻后的0.3796和0.36。 2.在稀释液中以LDL替代卵黄后，可以维持精液冷冻过程中山羊精子的胆固醇含量和胆固醇与磷脂的比例，能提高冷冻一解冻后山羊精子的活率、质膜完整率和顶体完整率。因此，LDL可以替代卵黄作为山羊精液冷冻的保护剂。LDL的添加量以9gLDL/100ml对精子的保护作用最好。 3.在稀释液中以LDL，替代卵黄后，可以维持精液冷冻过程中精子的胆固醇含量和胆固醇与磷脂的比例，提高冷冻后精子的活率。而在质膜和顶体方面，与卵黄相似。因此，LDL可以作为绵羊精液冷冻的保护剂，保护效果较卵黄好，LDL在稀释液中的添加量以9gLDL/100ml为宜。 4.在LDL稀释液中添加PCS，可提高冷冻后山羊精子胆固醇与磷脂的比值，可进一步提高山羊精液冷冻后精子的活力和质膜完整率，而对精子顶体无不良影响。 5.在卵黄稀释液中添加PCS可提高山羊精子冷冻后的磷脂含量，避免山羊精子在冷冻过程中胆固醇的流失，维持冷冻过程中精子胆固醇与磷脂的比例，提高精子活率、精子质膜完整率和精子顶体完整率(Ⅰ型顶体)，可以作为山羊精液冷冻稀释液的成分。添加量以0.10gPCS/100ml为宜。 6.在LDL稀释液中添加PCS对绵羊精子在冷冻过程中精子磷脂含量、精子质膜和顶体完整率影响不大，不利于精子的活率，但可提高精子胆固醇含量和胆固醇与磷脂的比例。 7.在卵黄稀释液中添加PCS可提高绵羊精子冷冻后磷脂含量，保持精子胆固醇的含量，维持精子的胆固醇与磷脂的比例，提高精子活率、精子的质膜完整率和精子顶体完整率。在卵黄稀释液中添加PCS，有利于提高绵羊精液的冷冻保存效果。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：图表目录、缩略语表

声明

1引言

1.1国内外精液冷冻保存技术研究进展

1.2绵羊精液冷冻发展现状及研究进展

1.3山羊冷冻精液发展现状及研究进展

1.4精液冷冻保存机制

1.4.1冰晶形成的机理

1.4.2冷冻对细胞的损伤

1.4.3精液冷冻过程中的变化

1.5精子的膜脂及其作用

1.5.1精子的膜脂

1.5.2胆固醇及磷脂在细胞中的作用

1.5.3类固醇硫酸脂对精子的作用

1.5.4精子在附睾中的成熟及其脂类的变化

1.5.5胆固醇对精子的作用

1.6膜脂对精子获能和顶体反应的作用机制

1.7 LDL结构特性及对精子冷冻保护作用

2材料与方法

2.1实验动物

2.1.1山羊

2.1.2绵羊

2.2材料

2.2.1主要试剂

2.2.2主要仪器

2.3试验设计

2.3.1研究思路

2.3.2试验设计

2.4实验方法

2.4.1稀释液的配制

2.5采精操作步骤

2.5.1假阴道的安装和消毒

2.5.2台畜的准备

2.5.3采精技术

2.6精子的洗涤

2.7精子密度测定

2.8精子活力的测定

2.9精子项体完整率的测定

2.9.1抹片

2.9.2风干

2.9.3固定

2.9.4水洗

2.9.5染色

2.9.6水洗

2.9.7精子顶体的观察

2.9.8计算

2.10精液冷冻保存程序

2.11精子质膜完整性的低渗膨胀测定

2.12精子脂质的抽提

2.13胆固醇的测定方法

2.13.1测定原理

2.13.2胆固醇测定试剂盒

2.13.3操作步骤

2.14磷脂的测定方法

2.14.1磷脂测定用液

2.14.2磷脂的测定方法

2.15卵黄LDL的提取

2.16数据统计处理

3结果

3.1卵黄稀释液对羊精液冷冻后精子脂类含量的影响

3.1.1卵黄稀释液对山羊精液冷冻后精子脂类含量的影响

3.1.2卵黄稀释液对绵羊精液冷冻后精子脂类含量的影响

3.2 LDL对精液冷冻过程中羊精子脂类含量的影响

3.2.1 LDL对精液冷冻过程中羊精子磷脂含量的影响

3.2.2 LDL对精液冷冻过程中精子胆固醇含量的影响

3.2.3 LDL对冷冻过程中羊精子胆固醇和磷脂比例的影响

3.3添加胆固醇硫酸脂钾盐(PCS)对精子中脂类含量的影响

3.3.1添加PCS对羊精子中磷脂含量的影响

3.3.2添加PCS对羊精子中胆固醇含量的影响

3.3.3添加PCS对精子胆固醇和磷脂比例的影响

3.4 LDL对羊精子活力、质膜完整率和顶体完整率的影响

3.4.1 LDL对羊精子活力的影响

3.4.2 LDL对羊精子质膜完整率的影响

3.4.3 LDL对冷冻后羊精子顶体完整率的影响

3.5 PCS对羊精子活力、质膜完整率和顶体完整率的影响

3.5.1 PCS对羊精子活力的影响

3.5.2 PCS对羊精子质膜完整率的影响

3.5.3 PCS对羊精子顶体完整率的影响

4讨论

4.1卵黄稀释液在羊精液冷冻过程中对精子的影响

4.1.1卵黄稀释液在山羊精液冷冻过程中对精子脂类的影响

4.1.2卵黄稀释液在绵羊精液冷冻过程中对精子脂类的影响

4.2添加LDL对羊精液冷冻过程中精子的影响

4.2.1添加LDL对山羊精液冷冻过程中精子的影响

4.2.2添加LDL对绵羊精液冷冻过程中精子的影响

4.3添加胆固醇硫酸脂(PCS)对羊精液冷冻过程中精子的影响

4.3.1添加胆固醇硫酸脂(PCS)对山羊精液冷冻过程中精子的影响

4.3.2卵黄或LDL稀释液中添加PCS对绵羊精子的影响

4.4 LDL代替卵黄在精液冷冻过程中对精子保护的可能机理

4.5冷冻保存过程中PCS对精子保护作用的可能机理

5结论

致谢

参考文献

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