布鲁菌内蒙古分离株部分外膜蛋白基因的克隆与序列分析

摘要

本研究根据GenBank中已发表的布鲁菌株基因序列设计特异性引物。应用聚合酶链式反应(PCR)技术，扩增出6个内蒙古分离株(NH-B1、NH-B2、NH-B3、NH-R1、NH-R2、NH-R3)的OMP19、OMP28、OMP25、OMP31基因，将纯化的目的DNA与PMD19-T载体连接，转化DH5a感受态细胞，提取质粒，用PCR法鉴定，将鉴定为含有阳性质粒的菌液测定基因序列。测序结果表明：测定的OMP19基因节段长618bp，均包含完整的开放性阅读框(Open Reading Frame，ORF)，位于43～576bp；OMP28基因节段长953 bp，包含完整的开放性阅读框(ORF)，位于151-903 bp；测定的OMP25基因节段长865bl,，均包含完整的开放性阅读框(ORE)，位于1 66-808 bp；OMP31基因节段长1167bp，包含完整的开放性阅读框(ORF)，位于137-859bp。
　　 应用DNAstar软件将测定序列与参考序列的核苷酸的同源性进行比较分析，6个分离株的OMP19基因核苷酸序列之间同源性很高，在99．8％-100％之间；与参考菌株的同源性也很高在99．4％～100％之间。6个分离株的OMP28基因核苷酸序列之间具有很高的同源性在99.9％～100％之间，其中，NH-B2、NH-B3、NH-R1和NH-R2同源性为100％，NH-B1和NH-R3的同源性也是100％，NH-B2、NH-B3、NH-R1、NH-R2和NH-B1、NH-R3之间同源性为99．9％1与参考菌株的同源性在99．6％～100％之间。6个分离株的OMP25基因核苷酸序列相互之间同源性很高在99．5％-100％之间；与参考菌株的同源性在99．1％-100％之间；其中，NH-B2、NH-B3、NH-R1、NH-R2与Brucella abortus S19的同源性为100％，NH-B1与Brucellasuis 1330的同源性也为100％。NH-B1、NH-B2和NH-R3分离株的OMP31基因核苷酸序列相互之间同源性为100％；与参考菌株的同源性在99.6％～100％之间。6个分离株同一组之间，其同源性均大于99~,4，与参考菌株相比，其各自的同源性亦保持在98％以上，显示布鲁菌OMPl9、OMP25、OMP28以及OMP31基因种间的高度保守性，这与参考文献结果相一致。

目录

1引言

2材料和方法

3结果

4讨论

5结 论

致 谢

参考文献

作者简介

论文说明:缩略词表

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