tPA-PAI-1系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的表达

摘要

为了初步了解组织型纤溶酶原激活剂(tissue-plasminogen activator，tPA)、1型纤溶酶原激活剂抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)和纤溶酶原(plasminogen，PLG)在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的潜在作用；本文运用实时定量RT-PCR技术分别检测体外成熟过程中不同时间段（0 h、8 h、16 h、24 h）、添加不同浓度卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，FSH)以及卵泡刺激素受体结合抑制剂(follicle-stimulating hormone receptor-binding inhibitor，FRBI-10)成熟培养16 h后牛卵丘细胞和卵母细胞中tPA、PAI-1及PLG基因相对表达变化，观察添加不同浓度FSH成熟培养16 h后卵丘细胞膨胀程度差异，并统计卵母细胞第一极体排出情况。
　　1.卵丘卵母细胞复合体在体外成熟过程中，卵丘细胞和卵母细胞tPA mRNA相对表达量，于体外成熟16 h显著高于0 h和8 h，24 h达到最高(P<0.05)；而卵丘细胞PAI-1mRNA相对表达量于8 h达到最高，显著高于16 h和24 h(P<0.05)。卵丘细胞PLG mRNA相对表达量总体趋势和tPA类似，于16 h显著高于0 h和8 h，在24 h达到最高(P<0.05)。卵母细胞PAI-1 mRNA相对表达量于16 h显著高于0 h和8 h，达到最高，并显著高于24 h(P<0.05)。
　　2.在添加不同浓度FSH(0、0.01、0.1和1 IU/mL)体外成熟16 h的各处理组，卵丘细胞中tPA mRNA相对表达量随FSH添加浓度的升高而升高，当FSH添加浓度1 IU/mL，卵丘细胞之间的缝隙连接较为松散且发暗。卵丘细胞中的PAI-1 mRNA相对表达量在0.01 IU/mLFSH时高于其他各处理组；同时卵丘细胞PLG mRNA表达水平在0.01 IU/mL FSH时达到最低，于0.1 IU/mL和1 IU/mL时显著升高(P<0.05)。卵母细胞tPA表达变化显示出与第一极体排出率相似的趋势，即0.01 IU/mL FSH处理组的tPA mRNA水平和第一极体排出率显著高于其他处理组(P<0.05)。卵母细胞中PAI-1 mRNA相对表达量在0.01 IU/mL FSH时最高，显著高于其他各FSH添加组(P<0.05)。
　　3.在添加FRBI-10体外成熟16 h的各处理组，在只添加FSH组的卵丘细胞tPA mRNA相对表达量显著高于其他各处理组(P<0.05)；卵母细胞中tPA mRNA相对表达量在只添加FSH组显著高于空白组(P<0.05)，在只添加FSH组，卵丘细胞和卵母细胞中PAI-1 mRNA相对表达量最高，显著高于其他各处理组(P<0.05)；卵丘细胞和卵母细胞PLG mRNA相对表达量在只添加FSH组却显著低于空白组(P<0.05)。
　　综合以上研究结果，本研究认为：牛卵丘细胞中tPA与PAI-1基因的表达受FSH正向调节，而PLG基因表达却受到FSH的抑制；进而推测，tPA-PAI-1系统对卵丘细胞在体外成熟过程中的扩散并不起促进作用；在卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中，tPA-PAI-1系统可能参与对牛卵泡排卵过程的调控。同时，tPA在卵母细胞中的表达是否与其第一极体排出有关，需进一步实验验证。本实验结果为进一步研究tPA-PAI-1系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的具体作用奠定了基础。

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缩 略 语 表

1 引言

1.1 tPA、PAI-1及PLG概述

1.2 FRBI-10的作用原理

1.3 卵母细胞体内获得发育能力

1.4 卵母细胞的体外成熟

1.5 tPA-PAI-1系统与排卵

1.6 研究背景和意义

2 材料与方法

2.1 仪器和试剂

2.2 方法

3 结果与分析

3.1 PCR产物特异性确定

3.2 成熟过程中牛卵丘细胞、卵母细胞tPA-PAI-1系统基因表达

3.3 添加不同浓度FSH成熟培养16h卵丘细胞、卵母细胞tPA-PAI-1系统基因表达

3.4 添加FRBI-10成熟培养16h卵丘细胞、卵母细胞的tPA-PAI-1系统基因表达

3.5 不同浓度FSH处理组，体外成熟培养16h COCs中卵丘膨胀程度及形态

3.6 不同FSH浓度培养16h后卵母细胞第一极体排出情况

4 讨论

4.1 体外成熟过程中tPA-PAI-1系统基因表达与排卵的关系

4.2 FSH对卵丘细胞中tPA-PAI-1系统表达的影响

4.3 tPA-PAI-1系统与卵丘扩散的关系

4.4 tPA-PAI-1系统在卵丘细胞表达对卵母细胞的影响

5 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介