消化酶、血清和催乳素对奶牛乳腺上皮细胞培养的影响

摘要

本研究通过对奶牛乳腺上皮细胞培养过程中几个关键的影响因素进行初步摸索，为以后利用乳腺上皮细胞研究营养因子对乳成分合成的影响奠定基础。试验以泌乳期的奶牛乳腺组织为材料，进行了以下研究：
　　1、探讨了75％酒精浸泡奶牛乳腺组织块、不同消化酶及浓度组合消化分离细胞和胎牛血清（FBS）浓度对奶牛乳腺上皮细胞培养的影响。取大小相同组织块在75%酒精中分别浸泡0s、30s、60s、90s、120s后消化分离细胞进行培养，观察细胞培养中的污染情况。试验结果表明：组织块在75%酒精中浸泡60s细胞培养不污染，细胞生长最好；等量的组织块分别在0.5%Ⅰ胶原酶、0.5%Ⅱ胶原酶、0.2%Ⅰ胶原酶、0.2%Ⅱ胶原酶、0.25%胰酶+0.5%Ⅰ胶原酶、0.25%胰酶+0.5%Ⅱ胶原酶、0.25%胰酶+0.2%Ⅰ胶原酶、0.25%胰酶+0.2%Ⅱ胶原酶消化2h，获取细胞后进行培养，观察消化过程中组织块的变化以及原代培养的细胞生长状况。试验结果表明：0.25%胰酶+0.2%Ⅱ胶原酶消化的组织块生长的乳腺上皮细胞最多，状态最好，后期生长状态最佳。配制含0%FBS、5%FBS、10%FBS、15%FBS、20%FBS的培养基，分别用这5种培养基培养细胞。试验结果表明：含5%与10% FBS的培养基培养的细胞数量无明显差异（p>0.05）,显著高于含0%、15%、20%FBS的培养基培养的细胞数量（p<0.05）；
　　2、探讨了不同时间添加催乳素(PRL)对奶牛乳腺上皮细胞形态、活性及基因表达的影响。第2代和第3代细胞分别采用一直不添加PRL、培养24h后添加PRL、一直添加PRL3种方式进行细胞培养，试验结果表明：培养的第2代和第3代细胞在形态和活力上均无显著差异（p>0.05）；第2代细胞培养24h后添加PRL，αs1-casein、κ-casein、β-casein的基因表达量均显著高于一直添加PRL或一直不添加PRL组的细胞（p<0.05）。3种方式培养第3代细胞时，αs1-casein、κ-casein、β-casein基因表达量均无显著差异（p>0.05）。

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1 引言

1.1 动物细胞的培养

1.2 乳腺上皮细胞培养中几个关键的因素

1.3 培养上皮细胞的鉴定

1.4 研究目的及意义

1.5 研究内容

1.6 研究路线

2 奶牛乳腺上皮细胞培养条件的优化

2.1 材料方法

2.2 试验结果

2.3 分析讨论

2.4 小结

3 奶牛乳腺上皮细胞形态及生物学测定

3.1 材料方法

3.2 试验结果

3.3 分析讨论

3.4 小结

4 催乳素添加时间对奶牛乳腺上皮细胞基因表达量的影响

4.1 材料方法

4.2 试验结果

4.3 分析讨论

4.4 小结

5 总体讨论

6 结论

致谢

参考文献

附 录

作 者 简 介