致病性大肠杆菌对动物机体免疫机能及肠道形态结构的影响

摘要

本论文通过对110头奶牛的粪样进行了大肠杆菌分离培养、生化特征鉴定、血清型分型、动物致病性试验，采用O抗原定型血清鉴定出该奶牛养殖场不同血清型致病性大肠杆菌的分布，其中优势优势血清型为 O1、O2、O8、O78和 O86菌株，在此基础上采用动物试验及实验室分析的方法研究致病性大肠杆菌对奶牛的内分泌状态及免疫功能的影响。同时通过小鼠感染血清型致病性大肠杆菌的试验探讨致病性大肠杆菌对肠道黏膜形态结构的影响。揭示致病性大肠杆菌在当代奶牛养殖中对奶牛的危害，为建立奶牛健康生产体系提供理论依据。论文主要包括3个试验：
　　试验一：在内蒙古大漠林深牧场选取110头荷斯坦奶牛，直肠采粪法采集粪样。通过大肠杆菌培养纯化、生化特征鉴定、血清型分型、动物致病性试验分析奶牛肠道内大肠杆菌的寄生情况。结果表明： O1、O2、O8、O78和 O86致病性大肠杆菌分别占定型致病性菌株的23.08%、10.26%、20.51%、10.26%和7.69%。同时有其他血清型致病性大肠杆菌，但检出率较低。
　　试验二：经试验一分离鉴定后，选择携带不同血清型致病性大肠杆菌的奶牛，体重、胎次接近，每个血清型选择3头，尾静脉采血。采用放免法测定血清中与免疫相关激素、细胞因子的含量，比色法测定血清免疫球蛋白 A（IgA）与免疫球蛋白G（IgG）的含量，使用流式细胞仪测定外周血 CD3+、CD14+和 CD21+细胞所占的百分比，探讨致病性大肠杆菌对奶牛免疫机能的影响。结果表明：（1）肠道内寄生 O2、O8和 O78血清型大肠杆菌对促肾上腺皮质激素（ACTH）的影响显著（P<0.05）；O1、O8、O78、O2和 O86血清型致病性大肠杆菌对生长激素（GH）、促生长因子 IGF-1含量的影响显著（P<0.05）；O2、O78、O8和 O86血清型大肠杆菌对皮质醇（COR）含量的影响显著（P<0.05）；O1、O78血清型致病性大肠杆菌对促甲状腺激素（TSH）影响显著（P<0.05）；O8血清型致病性大肠杆菌对三碘甲腺原氨酸（T3）含量的影响显著（P<0.05）；O78血清型致病性大肠杆菌对甲状激素（T4）与瘦素（LEP）含量的影响显著（P<0.05）。（2） O1、O2、O78、O8和 O86血清型致病性大肠杆菌对奶牛血清白介素-2（IL-2）含量的影响显著（P<0.05）；O1、O78、O2和 O86血清型致病性大肠杆菌对奶牛血清白介素-6（IL-6）含量的影响显著（P<0.05）；O78、O2和O8血清型致病性大肠杆菌对奶牛血清白介素-8（IL-8）、干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响显著（P<0.05）。（3）O1、 O78、 O8和 O86血清型致病性大肠杆菌对奶牛血清IgA、IgG含量影响显著（P<0.05）；O2、O8和 O86血清型致病性大肠杆菌对奶牛外周血中 CD3+水平影响显著（P<0.05），均高于对照组；携带 O1与 O2血清型致病性大肠杆菌奶牛外周血中 CD14+水平显著高于对照组（P<0.05）；携带 O1、O2、O78和 O8血清型致病性大肠杆菌奶牛外周血中 CD21+水平显著低于对照组（P<0.05）。提示肠道寄生致病性大肠杆菌导致奶牛的内分泌发生变化，免疫功能下降。
　　试验三：将60只健康小白鼠，随机分为6组，每组小鼠10只，进行灌胃血清型致病性大肠杆菌 O1、O2、O78、O8和 O86菌液。灌胃前禁食12h，第一组为对照组，对照组不攻毒致病菌，其余5组分别灌胃已制备好的 O1、O2、O78、O8和O86菌液。7d后断颈致死，迅速剖腹，取十二指肠、回肠、空肠各段大约1cm用10%中性福尔马林固定，做成石蜡切片，HE染色后显微镜观察。结果显示：致病性大肠杆菌对小鼠肠道黏膜的破坏严重，从破坏程度来看，O78组小鼠的十二指肠几乎失去吸收营养物质功能。

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插图和附表清单

缩 略 词 表

1 引言

1.1 畜禽养殖业中的粪便污染及其微生物的危害

1.2 大肠杆菌病原学特点

1.3 大肠杆菌的致病性

1.4 大肠杆菌的血清型及病理特征

1.5 研究目的及内容

2 试验研究

2.1 试验一 奶牛肠道内致病性大肠杆菌的分离与鉴定

2.2 试验二 致病性大肠杆菌对奶牛免疫机能的影响

2.3 试验三 致病性大肠杆菌对小鼠肠道黏膜形态结构的影响

3 总体讨论

3.1 奶牛肠道内血清型致病性大肠杆菌的分布

3.2 致病性大肠杆菌对奶牛免疫机能的影响

3.3 致病性大肠杆菌对小鼠肠道黏膜形态的影响

4 总体结论

4.1 奶牛肠道致病性大肠杆菌的分布

4.2 致病性大肠杆菌对奶牛免疫功能的影响

4.3 牛源致病性大肠杆菌对奶牛内分泌功能的影响

4.4 牛源致病性大肠杆菌对小鼠肠道形态结构的影响

5 研究创新之处

6 展望

致谢

参考文献

作 者 简 介