高密度脂蛋白作为调理素促进单核细胞对A群链球菌的吞噬

摘要

高密度脂蛋白（high-density lipoprotein,HDL）的基本功能是作为反向运载工具，将胆固醇从肝外组织运送回肝脏进行代谢，在清除胆固醇的过程中发挥了重要作用。但许多研究证实HDL具有抗感染的作用。
　　近来，我们证明了HDL可以与M41型A群链球菌（group AStreptococcus,GAS）表面的Ⅰ型胶原样蛋白（streptococcal collagen-like protein1,Scl1）特异性结合，但其相互作用的病理或生理意义并不清楚。另外有研究证明一些清道夫受体可以介导单核细胞吞噬HDL。因此，我们提出了HDL可能作为调理素介导单核细胞对M41型GAS的吞噬的假说。本研究利用荧光标记和平板菌落计数等手段对这一假说进行了验证。实验结果表明，HDL能够显著促进U937单核细胞对GAS的吞噬效率，比对照提高了20％-30%，但小于低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）介导的调理吞噬效率（55.2%）。GAS与U937单核细胞共孵育60min后，被单核细胞吞噬的GAS均被杀死。尽管，极低密度脂蛋白（very-low-density lipoprotein,VLDL）也能够与M41型GAS（ATCC12373）特异性结合，但VLDL不能够提高U937单核细胞对GAS的吞噬效率。由于M41型GAS（CMCC32198）不能与HDL、LDL和VLDL特异性结合，因此HDL、LDL、VLDL并不能促进U937单核细胞对该菌的吞噬。
　　进一步研究发现，生理浓度的HDL（1000μg/ml）同样具有类似的调理作用。用CD36单抗处理U937单核细胞后，HDL基本失去了介导调理吞噬作用的能力，而CD4单抗对此调理吞噬作用无影响，因此，单核细胞表面参与调理吞噬作用的受体是CD36。另外，重组表达的M41型GAS的Ⅰ型胶原样蛋白（recombinant streptococcal collagen-like protein1,rScl1）可以竞争性的抑制GAS与HDL的结合，几乎完全抑制了这种调理吞噬作用。
　　因此，本研究证明了HDL可以作为调理素促进U937单核细胞对GAS的吞噬效率，也证明了单核细胞表面的CD36是调理素受体。

目录

缩 略 语 表

1 引言

1.1 A群链球菌

1.2 高密度脂蛋白及其功能

1.3 立题依据

1.4 研究内容

2.1 主要仪器设备

2.2 主要试剂

3.1A群链球菌ATCC 12373-M41 type GAS和CMCC 32198-M41 type GAS的培养及标记

3.2 U937单核细胞的冻存、复苏及培养

3.3 ELISA检测两株GAS与LDL、HDL、VLDL的结合

3.4 rScl1的诱导表达及纯化

3.5 rScl1内毒素的去除及蛋白质内毒素含量的测定

3.6 体外吞噬实验

4 实验结果与分析

4.1 ELISA验证LDL、HDL、VLDL与GAS的结合

4.2HDL可以作为调理素介导U937单核细胞吞噬M41型GAS (ATCC 12373)

4.3 不同浓度HDL介导U937单核细胞对ATCC-M41型GAS吞噬效率的影响

4.4 U937单核细胞表面参与调理吞噬作用的受体是CD36

4.5 rScl1抑制HDL介导的U937单核细胞对ATCC-M41型GAS的吞噬

5 讨论

致谢

参考文献

作 者 简 介