利用RNA干扰技术研究RORα对褪黑激素促进绒毛生长相关基因表达的影响

摘要

本实验利用 RNAi技术阻断在褪黑激素作用下的内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞中RORα基因的表达，应用荧光定量PCR技术检测干扰前后的RORα基因，以及与毛囊发育相关基因的表达情况，探讨RORα在褪黑激素促进绒毛生长中的作用，为进一步探索褪黑激素促进绒毛生长奠定了重要的理论基础。主要研究结果如下：
　　1.本试验采用IV型胶原酶和胰蛋白酶联合消化，避免了由于长时间的胰蛋白酶处理而造成的细胞损伤，能够更好更加效率的分离培养成纤维细胞。
　　2.利用shRNA转染绒山羊皮肤成纤维细胞48h后，经荧光定量PCR技术检测RORα基因的表达量，结果显示：转染后RORα mRNA表达量显著受到抑制（P﹤0.05），阴性对照组中的表达量几乎不受影响（P﹥0.05），说明该shRNA对RORα存在特异且高效的沉默作用。为进一步探索RORα基因在褪黑激素促进绒毛生长中的重要作用奠定基础，提供了新的研究方向。
　　3.在干扰抑制RORα基因的基础上分析β-catenin、SFRP1和TCHHL1基因的表达变化，添加褪黑激素后，β-catenin基因表达量显著增加（P﹤0.05），SFRP1基因表达量几乎不受影响（P﹥0.05），TCHHL1基因表达量显著降低（P﹤0.05）。转染后，三个基因的表达均呈现不同程度变化。提示了褪黑激素在绒毛生长中可能通过与RORα结合进而影响β-catenin、SFRP1和TCHHL1基因的表达，促进绒毛生长。

目录

声明

缩 略 语 表

1 引言

1.1 褪黑激素

1.2 RORα基因

1.3 RNA干扰技术

1.4 本研究的目的意义

1.5 研究的技术路线

2 研究一 内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞的体外培养

2.1 试验材料

2.2 试验方法

2.3 试验结果

2.4 讨论

3 研究二 RNA干扰抑制内蒙古绒山羊成纤维细胞内RORα基因的表达

3.1 试验材料

3.2 RORα基因特异性shRNA表达载体的构建

3.3 转染

3.4 荧光显微镜检测shRNA转染效率

3.5 利用RT-qPCR检测转染前后RORα基因的表达

3.6 数据分析

3.7 试验结果

3.8 讨论

4 研究三 RORα基因表达下调对SFRP1、TCHHL1、β-catenin基因的影响

4.1 试验材料

4.2 试验方法

4.3 试验结果

4.4 讨论

5 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介