内蒙古地区肠球菌临床分离株的耐药性与毒力基因的检测

摘要

肠球菌是人和动物肠道内的正常菌群，过去被认为不会引发致病，但在近年的研究中发现肠球菌可使人和动物致病，且肠球菌属感染已成为医院内致病菌的感染疾病的第三位。自2013年7月-2014年11月，本实验内蒙古中部地区羊场发生以神经症状为主要特征的脑组织及其他器官组织中多次分离到球菌，经过进一步鉴定后确认该分离菌株为肠球菌。由于屎肠球菌的分离比例较高，为进一步在临床上对此病原菌进行快速诊断，本研究建立了肠球菌与屎肠球菌进行了双重 PCR试验。建立了双重 PCR的试验条件和方法。
　　本试验将内蒙古中部地区分离到的羊源肠球菌菌株，结合本地区常用的抗生素药物，包括氟苯尼考、氧氟沙星、红霉素、恩诺沙星、万古霉素、土霉素、利福平、氨苄西林、链霉素，庆大霉素10种药物，利用微量肉汤稀释法，观察确定临床分离菌株的耐药性并测定其最小抑菌浓度（ MI C值）。并用 PCR方法对临床分离菌株的耐药基因进行检测， PCR试验结果表明：内蒙古中部地区羊源肠球菌具有氨基糖苷类耐药基因、红霉素耐药基因与四环素耐药基因。药物敏感性检测表明，临床分离菌株对土霉素、利福平、氨苄西林表现出明显的耐药性。对恩诺沙星、万古霉素、氧氟沙星较为敏感。
　　有相关研究表明肠球菌属的耐药性多与其毒力基因相关，因此本试验检测了分离菌株的毒力基因，同时本研究为初步探索屎肠球菌心内膜炎抗原基因（ EfaA）调控的蛋白的功能，对屎肠球菌的毒力基因 EfaA（心内膜炎抗原）进行了原核表达。试验结果表明：临床分离菌株检测到了 cyl、Ace、GelE、EfaA、AS、Esp毒力基因。经 Western-blot方法检测，本试验成功表达出 EfaA毒力基因。

目录

缩 略 语 表

引言

1 肠球菌属的生物特性

2 肠球菌的分型

3 肠球菌的致病性的研究

4 肠球菌的毒力基因

5 肠球菌的耐药性

6 肠球菌对万古霉素耐药性的研究

7 肠球菌耐药性与毒力基因的相关性的研究

试验一 肠球菌的分离、鉴定与同源性分析

1 材料

2 试验方法

3 结果与分析

4 讨论

试验二 羊源肠球菌属与屎肠球菌双重PCR方法的建立

1 材料

2 方法

3 结果与分析

4 讨论

试验三 临床分离菌株耐药性及耐药基因的检测

1 材料

2 方法

3 结果及分析

4 讨论

试验四 羊源屎肠球菌毒力基因的检测及心内膜炎基因 EfaA基因原核表达

1 材料

2 方法

3 试验结果

4 讨论

5 全文结论

致谢

参考文献

作 者 简 介