苜蓿花叶病毒复制酶基因全序列及其两个片段介导的抗病性研究

摘要

将苜蓿花叶病毒(Alfalfa mosaic virus,AlMV)复制酶P<,2>亚基(即90KD蛋白)基因的全长cDNA、5'端1/2cDNA、3'端1/2cDNA分别构建到植物表达载体pROKII中,得重组表达载体pAlMV-FL、pAlMV-5T、pAlMV-3T;重组表达载体经农杆菌LBA4404介导转化烟草,获得了相应的转基因烟草基因工程植株.复制酶基因全长cDNA和5'端1/2cDNA转化的转基因烟草株系,AlMV接种40天后不见病症,斑点酶联免疫吸附检测也不见有病毒粒子的存在;而3'端1/2cDNA转化的株系中,部分出现褪绿斑,同时能检测到病毒粒子的存在.研究表明AlMV复制酶基因不同片段转化的转基因植物对AlMV的侵染存在不同程度的抗性.

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文摘

英文文摘

引 言

论文正文

一、材料与方法

1.材料

1.1.供试植物材料

1.2.菌种和质粒

1.3.试剂

1.4.引物

2.方法

2.1.重组表达载体pALMV-FL、pALWV-5T、pALMV-3T的构建

2.2.重组表达载体pALMV-FL、pALWV-5T、pALMV-3T鉴定

2.3.重组表达载体pALMV-FL、pALWV-5T、pALMV-3T的酶切鉴定

2.4.植物组织的转化

2.5.转化后烟草的组织培养

2.6.转基因烟草的PCR检测

2.7.攻毒实验

2.8.斑点酶联免疫吸附测定

二、结果与分析

1.重组载体的构建结果

1.1.构建过程

1.2.转化载体的鉴定

2.三亲融合结果

3.烟草的转化结果

4.转基因烟草的检测结果

5.转基因植株抗性

5.1转基因植株抗性的表现型

5.2转基因植物的Dot ELISA检测结果

三、讨论

参考文献

综述

致 谢