阿尔巴斯白绒山羊精液冷冻方法研究

摘要

精液冷冻保存技术的原理是利用液氮、干冰或其它冷源,将精液经过适当的处理,使精子细胞的代谢完全停止,在升温后可恢复原来部分活性,从而达到长期保存的目的。使用时再解冻进行人工授精或体外受精。精液冷冻可大大提高种公畜的利用率,减少公畜的饲养量,节约成本且不再受地域、时间的限制。不仅有利于家畜品种改良,也是家畜育种和珍惜濒危物种保护的有效技术手段。总之,精液的冷冻保存对人类生殖医学、家畜繁殖育种及保护濒危野生动物等方面都有重要意义。
　　 绵羊的精液冷冻保存技术的研究,国外始于20世纪50年代；我国这方面的研究始于20世纪60年代中期。山羊的精液冷冻保存技术的研究,国外始于20世纪70年代中期。但是,由于山羊精子对温差变化敏感,冷冻解冻过程中精子功能极易受到损伤,导致山羊冷冻精液的效果可重复率低,冻精结果差异较大,应用冷冻精液人工授精后山羊的受胎率低于自然交配和常温保存的精液,严重制约了山羊精液在生产中的普及和应用。
　　 1.实验通过比对不同的稀释方法发现在室温接近4℃时一步稀释法和二步稀释法对于精子活率没有显著影响,在气温高于4℃时二步稀释法冷冻的精子活率显著好于一步稀释法。
　　 2.通过比较去精清和不去精清发现去除精清精子活率显著高于不去除精清,但是去除精清的质膜完整率也显著低于不去除精清,这是由于离心处理时对精子造成机械性损伤。
　　 3.通过染色和流式检测发现,FITC—PSA染色阴性的可能为顶体完整的精子,RH123染色阳性RH123++的可能为获能精子,线粒体高活性。不同羊个体的精子对于低温敏感度不一样,有些羊精子在冷冻一解冻过程中大部分疑似提前获能反应,而另外一些则很少有疑似提前获能反应。不同羊个体之间的冻精顶体完整率差异显著,因此应该选择合适的个体进行精液冷冻。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

第一章 精液冷冻稀释方法选择

1. 材料

1.1.主要仪器设备

1.2.实验材料

1.3. 主要试剂和耗材

1.4 溶液配方

2. 方法

2.1. 一步稀释法和二步稀释法的比较

2.2. 二步稀释法平衡时间的比较

2.3. 糟子活率检测

2.4. 整理数据

3. 结果

3.1. 一步稀释法和二步稀释法精子活率比较

3.2. 二步稀释平衡时间的比较

4. 讨论

5. 结论

参考文献

第二章 去除精清和不去除精清的比较

1. 材料

1.1.主要仪器设备

1.2. 实验材料

1.3. 主要试剂和耗材

1.4.溶液配方

2. 方法

2.1. 去精清不去精清比较

2.2. 去精清离心时间比较

2.3. 精子活率检测

2.4. 整理数据

3. 结果

3.1. 去精清不去精清比较

3.2. 去精清离心时间比较

4. 讨论

5. 结论

参考文献

第三章 精子的后期检测

1. 材料

1.1.主要仪器设备

1.2.实验材料

1.3. 主要试剂和耗材

1.4. 溶液配方

2. 方法

2.1. 流式细胞仪检测

2.2.解冻精子

2.3. 精子活率的检测

2.4.顶替完整性

2.5. 质膜完整率观察

2.6. 线粒体检测

3. 结果

3.1. 一步稀释法与二步稀释法

3.2. 去精清 不去精清

3.3. 个体差异

3.4.相关性分析

4.讨论

5. 结论

参考文献

图版

文献综述

参考文献

致谢