低钙敏感拟南芥自然变异种的筛选及相关基因的粗定位

摘要

为了能够更好地理解植物在低钙逆境中生长发育的分子机制，本实验主要以拟南芥自然变异种为材料，通过对96种自然变异种进行筛选，筛选出一株低钙敏感自然变异种Wt-5，对其进行表型分析，发现Wt-5与拟南芥野生型Col-0相比，在低钙培养基（含有0μM CaCl2、20μM CaCl2）中具有根短、叶小而且黄的表型，而在CK培养基（含有1mM CaCl2）中表型无明显差异。
　　通过原子吸收光谱的方法测定自然变异种Wt-5体内的总钙含量，发现生长在CK培养液中的Wt-5和野生型Col-0相比，体内总钙含量低于Col-0;当给予低钙处理后，发现在叶片（大叶或小叶）中，Wt-5体内的总钙含量仍低于Col-0。
　　我们将Wt-5与生态型Ler进行杂交，得到F1和F2代植株，经分析显示Wt-5为单基因隐性突变体。再利用图位克隆技术，将突变位点粗定位至拟南芥2号染色体18.14M-19.5Mbp范围内。

目录

声明

摘要

符号说明

一 引言

1．1 钙离子对植物的生理作用

1．2 植物吸收钙离子的分子机制

1．2．1 钙调素及类钙调素蛋白(CaM)

1．2．2 钙调磷酸酶B类蛋白(CBL)

1．2．3 钙依赖性蛋白激酶(CDPK)

1．3 钙资源现状

1．3．1 酸雨对土壤中钙的淋失

1．3．2 酸雨对植物中钙的影响

1．4 图位克隆的基本原理

1．5 本研究的目的与意义

二 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 植物材料

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要溶液与培养基的配制

2．1．4 引物列表

2．2 方法

2．2．1 拟南芥的播种与培养

2．2．2 自然变异种Wt-5的筛选

2．2．3 Wt-5水培表型观察

2．2．4 原子吸收测定总钙含量

2．2．5 CTAB法提取DNA

2．2．6 Wt-5相关基因定位(图位克隆)

三 结果与分析

3．1自然变异种Wt-5的表型分析

3．2 Wt-5总钙含量测定结果

3．3 Wt-5相关基因粗定位

四 结论与讨论

4．1 结论

4．2 讨论

参考文献

致谢