黄花苜蓿MfDREB1转录因子在提高转基因烟草抗逆性中的作用研究

摘要

本研究以T1代超表达黄花苜蓿逆境胁迫相关转录因子MfDREB1的心叶烟草和转化不含目的基因的空载体的转基因心叶烟草为研究材料，自交筛选获得了转基因烟草T3代纯合株系72个。在实验室条件下，分别用0℃、300 mM NaCl和20％ PEG6000模拟非生物环境胁迫处理野生型和转基因心叶烟草纯合植株A3-6和B3-8，烟草植株抗逆表型显示MfDREB1明显提高了转基因烟草的抗逆性。
　　运用实时荧光定量PCR技术，分析了3种逆境胁迫条件下的转基因烟草植株外源MfDREB1基因以及受其调控的下游抗逆基因NtERD10A和NtP5CS的表达，结果表明低温、高盐和干旱非生物胁迫处理后，转基因心叶烟草纯合植株A3-6中MfDREB1、NtERD10A和NtP5CS基因的相对表达量均呈现先升高后降低再升高的趋势;而胁迫处理前后，野生型心叶烟草和转基因心叶烟草纯合植株B3-8中MfDREB1、NtERD10A和NtP5CS基因的相对表达量无明显变化。
　　以超表达载体pPZP221（35S-MfDREB1-NOS）中MfDREB1基因的3'端序列(238bp)和NOS片段(253 bp)的重组片段(491 bp)做为杂交探针，运用地高辛标记法，对转基因烟草纯合植株进行Southern Blot检测，结果表明转基因心叶烟草纯合植株A3-6的基因组中有3拷贝外源重组片段插入，而野生型烟草和转基因心叶烟草纯合植株B3-8的基因组中没有检测到外源重组片段的插入。

目录

声明

摘要

部分缩写词说明

第一章 引言

1．1 转录因子概述

1．2 植物的非生物胁迫应答机制

1．3 DREB转录因子及受其调控的下游抗逆相关基因

1．3．1 DREB转录因子

1．3．2 受DREB转录因子调控的下游抗逆相关基因

1．4 DREB转录因子在提高植物抗逆性中的作用

1．5 黄花苜蓿MfDRE1转录因子的克隆及其生物学分析

1．6 黄花苜蓿及转基因T1代烟草

1．7 本研究的目的和意义

第二章 转基因心叶烟草纯合株系的筛选

2．1．实验材料

2．1．1 植物材料

2．1．2 实验试剂

2．2 实验方法

2．2．1 三种植物材料的处理与培养

2．2．2 转基因烟草植株的庆大霉素筛选及数据统计

2．2．3 转基因心叶烟草纯合植株材料的获得

2．3 实验结果与分析

2．3．1 转基因烟草植株的庆大霉素筛选及纯合植株的获得

第三章 转基因心叶烟草的抗逆性的作用研究

3．1 实验材料

3．1．1 植物材料

3．1．2 实验试剂

3．1．3 引物设计及合成

3．2 实验方法

3．2．1 烟草幼苗材料的培养

3．2．2 非生物胁迫处理

3．2．3 转基因烟草外源MfDREB1基因的表达分析

3．2．4 Southern Blot

3．3 实验结果与分析

3．3．1 非生物胁迫处理下的烟草表型分析

3．3．2 转基因烟草外源MfDREB1基因的表达分析

3．3．3 Southern Blot

第四章 讨论与结论

4．1 讨论

4．2 结论

参考文献

致谢