乳酸菌发酵骨粉产品的研发及其补钙成骨作用的研究

摘要

响应自治区提出的绿色农畜产品输出基地建设与转型升级的需要，开发绿色无污染的高科技高端产品、增加畜产品附加值已成为当务之急。以牛羊鲜骨为原料通过发酵研发补钙又促成骨的纯天然高端产品，提高畜牧资源的附加值，为民生健康做出贡献。选用三种乳酸菌发酵牛羊鲜骨粉，使羟磷灰石的钙以乳酸钙形式释放。经牛羊鲜骨—粉碎-灭菌-发酵-总混-冻干-干法制粒-压片制成生物活性制剂（产品），并在细胞，组织和动物水平上验证了产品的功效。用湿灰法消化骨粉用EDTA滴定方法测定总钙含量，用EDTA滴定方法测定游离钙，以平板倾注法测定活菌数。培养人成骨细胞hFOB并用产品刺激12 h后提取RNA在以荧光定量PCR检测COLLAGEN, RANKL，OPG三种基因的表达。以切除卵巢的方法制作了骨质疏松模型动物，并用全自动生化仪测定血清指标，取股骨制作病理切片经HE染色观察大鼠骨质疏松程度。灌胃给药法研究个体水平上的功效，灌胃两个月后动脉取血测定血清生化指标，再处死大鼠后取股骨制作病理切片HE染色观察大鼠摄取不同钙产品后骨质疏松程度。目前我们的产品已将不能吸收的羟磷灰石的37.61％转化为可吸收的游离钙（乳酸钙）形式，即，游离钙的含量增加了近20倍。并在骨质疏松动物模型动物水平上证明了补钙又能促进骨形成。还在细胞水平也初步证明该产品具有增加骨保护素表达和成骨作用。因此，本研究对于钙补充、促进骨形成及预防骨质疏松症都具有重要意义。
　　本研究主要内容包括：⑴乳酸菌发酵有效游离出骨粉中以羟磷灰石形式存在的结合钙为乳酸钙，乳酸钙含量增加了近20倍；⑵增加成骨细胞外钙离子浓度使OPG表达量增加，RANKL表达量增加，对GOLLAGEN的表达没有影响，说明产品具有成骨作用；⑶通过在细胞，组织和动物水平上实验证明产品对骨质疏松症的修复有显著性的效果。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

引言

第一章 乳酸菌发酵骨粉产品制备及其体外实验

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 乳酸菌发酵骨粉补钙产品活菌数变化

2．2 乳酸菌发酵骨粉产品游离钙含量增加

2．3 乳酸菌发酵骨粉产品刺激成骨细胞

讨论

第二章 骨质疏松动物模型建立和鉴定

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 去除卵巢前后大鼠体重变化

2．2 模型组和正常组大鼠血清中钙和碱性磷酸酶含量

2．3 模型组大鼠和正常组大鼠血清中甘油三酯，低密度脂蛋白，高密度脂蛋白，胆固醇，血糖变化

2．4 正常组老鼠和模型组老鼠股骨HE染色观察

讨论

第三章 骨粉发酵产品的动物体内研究

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 骨粉发酵补钙产品对骨质疏松模型组大鼠体重的的影响

2．2 骨粉发酵补钙产品对骨质疏松模型组大鼠血清中钙和碱性磷酸酶的变化

2．3 骨粉发酵补钙产品对骨质疏松模型组大鼠血清指标的影响

2．4 骨粉发酵补钙产品对骨质疏松模型组大鼠股骨的影响

讨论

结论

文献综述：钙摄入与预防骨质疏松症

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文