miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究

摘要

miRNAs是长度为22nt的内源性非编码RNA,在体内作为信号分子参与调节多种细胞活动.miRNAs的异常表达常与疾病发生相关,并且在癌症的诊断、治疗和预后方面具有临床应用潜力.本文对miR-342-5p在非小细胞肺癌(non-small-cell carcinoma,NSCLC)细胞A549和H460中的作用及其调节机制进行了研究.
　　1.miR-342-5p在NSCLC A549和H460中的表达及作用
　　为探究miR-342-5p在A549和H460中的作用,本研究首先利用实时定量PCR(qPCR)检测miR-342-5p在肺癌细胞A549和H460中的表达,结果显示miR-342-5p在A549和H460中的表达低于正常的肺上皮细胞HBE.其后,将miR-342-5p mimics分别转染A549和H460细胞,通过提高miR-342-5p在细胞中的表达检测其对肺癌细胞恶性表型的影响.结果显示,miR-342-5p的表达升高后显著抑制了A549和H460的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力.为进一步验证这一结果,将构建的过表达miR-342-5p的慢病毒载体感染A549和H460细胞,并利用嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞.细胞恶性表型检测结果表明,稳定过表达miR-342-5p同样显著抑制了A549和H460细胞的增殖、迁移和克隆形成能力.最后,将稳定过表达miR-342-5p的H460细胞皮下注射到裸鼠体内,结果显示,与对照组相比miR-342-5p抑制了H460的体内成瘤率,肿瘤的体积和重量也减少.上述结果表明miR-342-5p在肺癌细胞中具有抑癌基因的作用.
　　2.miR-342-5p靶基因检测及其相互作用关系并验证
　　为了探讨miR-342-5p影响A549和H460细胞恶性表型的作用机制,首先利用TargetScan7等软件预测了miR-342-5p的靶基因,并用qPCR检测了各候选靶基因在A549和H460中的表达,在检测的候选靶基因中,ELP3、FURIN和PPARGC1A等基因在两种肺癌细胞中的表达都显著高于HBE细胞,而在过表达miR-342-5p的两种肺癌细胞中这3个基因的表达量都显著降低.之后用荧光素酶报告实验(Luciferase assay)证明PPARGC1A是miR-342-5p的一个靶基因.
　　为进一步验证miR-342-5p和靶基因PPARGC1A之间的相互作用,本研究合成了PPARGC1A基因的干扰片段,转染细胞后降低了PPARGC1A基因的表达量.细胞恶性表型检测表明,A549和H460细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力都受到了显著的抑制.
　　综上所述,miR-342-5p在肺癌细胞A549和H460中低表达,miR-342-5p过表达后,可降低A549和H460细胞的增殖、迁移、侵袭及克隆形成的能力,并抑制体内成瘤.荧光素酶报告实验证明PPARGC1A是miR-342-5p的一个靶基因,降低PPARGC1A的表达量能显著抑制细胞恶性表型.因此,miR-342-5p抑癌的作用可能是通过直接靶向PPARGC1A基因起作用.

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摘 要

ABSTRACT

缩略词表

第一章

综述部分 非编码RNA研究进展

1 小非编码RNA

1.1 MiRNAs

1.2 piRNAs

2 长非编码RNA

2.1 LncRNAs的生物发生

2.2 LncRNAs的调节机制

2.3 LncRNAs的作用

2.4 CircRNAs

3 非编码RNA的相互作用

第二章

miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用

引 言

实验材料及方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

实验结果

3.1 miR-342-5p在正常肺上皮细胞和非小细胞肺癌细胞系中的表达

3.2 转染miR-342-5p mimics对正常肺上皮细胞HBE的影响

3.3 转染miR-342-5p mimics对肺癌细胞A549恶性表型的影响

3.4 转染miR-342-5p mimics对肺癌细胞H460恶性表型的影响

3.5 筛选稳定过表达miR-342-5p的A549和H460细胞株

3.6 稳定过表达miR-342-5p对A549恶性表型的影响

3.7 稳定过表达miR-342-5p对H460恶性表型的影响

讨 论

第三章

miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞A549和H460中的调节机制研究

引 言

实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

实验结果

3.1 靶基因预测与验证

3.2 抑制PPARGC1A的表达对A549细胞恶性表型的影响

3.3 抑制PPARGC1A的表达对H460细胞恶性表型的影响

讨 论

参考文献

结 论

致 谢

攻读学位期间发表的学术论文