黑腹果蝇脱氧核苷酸激酶(Dm-dNK)基因作为新的自杀基因治疗实体肿瘤

摘要

该研究目的就是在人体肿瘤细胞水平,评估黑腹果蝇胶氧核苷酸激酶能否在人类肿瘤细胞内表达细胞系并继续保持高的催化活性,以及增强一系列的癌前药物(核苷到类似物)的肿瘤杀伤效果,及其旁观者效应;利用核苷酸还原酶抑制剂HU可以影响dNTPs池的特性,研究HU是否增强Dm-dNK/BVDU自杀基因系统的肿瘤杀伤力及旁观者效应;利用标记基因绿色荧光蛋白(GFP)及DNA复染,确认Dm-dNK在人类肿瘤细胞中的表达位点,并试图人工突变核信号,改变其亚细胞表达水平.同时比较Dm-dNK不同亚细胞位点表达时基细胞毒性和旁观者效应差别.为该基因作为新的更有效的自杀基因进一步用于动物模型实验,乃至早期临床试验打下必要的基础.利用逆转录病毒载体感染肿瘤细胞,黑腹果蝇的脱氧核苷酸激酶(Dm-dNK)可以在人类肿瘤细胞中表达并继续保持高的催化活性,在人类肿瘤细胞内,Dm-dNK可以有效初始磷酸化一系列嘧啶及嘌呤类核苷酸类似物,显著提高这些核苷酸类似物的细胞毒性,并可引出旁观者效应;核苷酸还析酶抑制剂羟基脲基脲可以增强表达Dm-dNK的软骨肉瘤细胞的杀伤力及旁观者效应,同时可以增强表达Dm-dNK的胰腺癌细胞的细胞毒性,但不能增强其旁观者效应.该研究结果还表明:由于在C末端存在细胞核信号,野生型黑腹果蝇的脱氧核苷酸激酶表达于人类肿瘤细胞的细胞核;人工突变核信号,可以将Dm-dNK引导表达于细胞浆;表达于细胞核或细胞浆,并不影响其肿瘤细胞杀伤力及旁观者效应.

目录

英文缩略语

主论文

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

副论文一

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

副论文二

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

致谢

文献综述

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