血链球菌一种保守蛋白基因克隆与分析

摘要

该实验在前期工作的基础上,根据血链球菌ATCC10556的AP-PCR产物700bp序列设计特异引物,通过PCR扩增血链球菌ATCC10556基因组DNA制备探针,对基因组DNA进行Southern印迹杂交分析,特异性杂交信号位于7kb处,分离该7kb片段并将其克隆至测序载体上,再利用斑点杂交方法检测LB平板上的阳性克隆获得含有特异PCR产物的目的克隆.利用此方法无须制备血链球菌基因文库筛选陧性克隆,节省了时间和费用.限制性酶PstI对目的的克隆进行酶解反应,获得6个亚克隆,在分别对6个亚克隆完成测序后,利用引物步行法将6个片段按顺序进行排列,完成7kbDNA片段的全部序列测定.测序结果利用Genework软件分析后发现,该7kb片段中含有一个约4.7kb的完整保守蛋白基因序列,经GenBank查新后证实该基因因为尚未被克隆的新基因,将此完整基因命名为Sscp(Streptococcussanguinisconservedprotein)gene,其编码的蛋白命名为sscp163,该基因在GenBand的登陆号为AY032739.该研究为进一步分析血链球菌中sscp163蛋白的功能及作用提供了实验基础.结论:1.该实验首次发现并克隆了血链球菌ATCC10556中完整的保守蛋白基因,将其命名为Sscp基因.该基因编码区全长439bp,编码1465个氨基酸.Genbank中的登陆号为AY032739;2.血链球菌ATCC10556菌株中sscp163保守蛋白是一种跨膜蛋白,含有两个AAA结构域;3.sscp163保守蛋白与大肠杆菌FtsK有相似功能,参与血链球菌的细胞分裂活动.