计算机辅助数字图像分析系统定量检测TGFβ1和FN与肝纤维化相关性的应用研究

摘要

前言 肝纤维化是许多慢性肝病发展的普遍结果,可最终导致肝硬化和储备功能低下,是一种严重威胁人类健康的慢性疾病.研究肝纤维化发展过程及发病机理、以及客观评价肝纤维化程度,有极其重要的意义.该文通过对肝穿刺标本的几种不同特殊组织学染色及应用计算机辅助数字图像分析系统定量检测TGFβ1和FN与肝纤维化的关系,从而补充和发展了肝纤维化的分子水平研究方法.并试图取得计算机测量方法的可靠性.材料与方法 实验方法:2.1用快速肝穿法取材,至少1厘米长的肝组织,福尔马林固定,石蜡包埋,每一组织切4张4μm厚的切片.分别行HE染色、Masson染色、TGFβ1染色、FN染色.2.2病理分级:首先由两位资深的病理学专家在不了解病人临床背景的情况下,在四张切片中随机选两张,分别进行HE染色、Masson染色,按2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订《病毒·1·性肝炎防治方案》中慢性肝炎分期标准,进行纤维化程度(S)分期,判定肝纤维化程度,当两人有分歧时,则参考第三位病理学专家的意见.2.3实验分组:按肝纤维化程度的分级分为以下5组:S<,0>组(n=7)、S<,1>组(n=12)、S<,2>组(n=15)、S<,3>组(n=16)、S<,4>组(n=7).再在每组剩下的两张切片中随机选一张切片分别进行TGFβ1和FN免疫组织化学测定.按试剂盒说明操作,结果判定.TGFβ1的免疫组化:阳性产物位于胞浆,阳性判断标准为该位置出现棕黄色颗粒;FN的免疫组化测定:阳性产物位于细胞外,呈棕黄色颗粒.于40倍物镜下用OLYMPUS C3040-ADU彩色图像摄录输入仪将图像输入Meta Morph/DP10/BX41彩色图像分析仪,每张切片选取四周及中央5个区域,均取该区域阳性反应最多的视野,测阳性反应面积比(阳性面积/肝组织面积×100％),即平均光密度值,再取平均值.Masson染色:胶原纤维染色成蓝色.该方法是测量其染成蓝色的像素和,除以组织切片的总像素,得出胶原纤维所占部分的面积比.三者均用阳性反应面积比来代表其实际水平.3.统计学处理:计量资料用x±s表示,采用SPSS 10.0统计软件进行方差齐性检验,在此基础上进行ANOVA(单因素方差分析)及Spearman相关分析,P<0.05时就认为有统计学意义.结论1.肝纤维化早期时TGFβ1就明显增高,其增高程度与纤维化分级成正相关.2.FN随着肝纤维化分级程度增加表达增高,但在肝硬化时却减少.3.该研究表明图像分析法的测量结果与分级法的判断有显著的相关关系,同时又是定量评估肝纤维化的程度,给临床判断病情及药物疗效提供了可靠的指标.

目录

英文缩略语

1.前 言

2.材料与方法

3.实验结果

4.讨 论

5.结 论

本研究新见解

参考文献

致 谢

综 述

个人简介