DOC-1R蛋白抑制细胞周期S期复制和CDK2序列影响其入核的初步研究

摘要

目的：细胞周期调控及其与癌变的关系是当前细胞生物学研究的热点.该文结合转染技术及间接免疫荧光技术,观察细胞内DOC-1 R转染基因表达对于DNA复制以及中心体复制的影响.另外,我们对CDK2蛋白质序列与其入核转运过程关系进行了初步分析,并构建了原位示踪外源目的基因表达的工具性载体pZX,转染细胞后该载体具有使目的蛋白与细胞膜标志蛋白同时独立表达的优势,并能够与流式细胞仪、间接免疫荧光技术相结合,为进一步研究DOC-1 R蛋白的表达对于CDK2细胞内定位的影响及其在细胞周期调控中的作用提供实验基础.结论1.CDK2蛋白跨核膜转运依赖其蛋白质多肽序列的完整性,CDK2蛋白多肽链中不含有独立的核定位信号.其人核过程可能是由CDK2蛋白部分氨基酸共同形成高级结构,并依赖此高级结构与其他含有人核信号的蛋白形成复合物,从而被动跨核膜人核.2.成功构建了pZX载体并改建获得了pZX2和pZX3,它们可通过同时表达定位于细胞膜的EGFP而原位示踪外源目的基因的表达.3.应用pFLAG-DOC-1R重组质粒进行细胞转染实验研究,发现DOC-1R转基因表达抑制HeLa细胞内DNA复制.4.应用pFLAG-DOC-1R重组质粒进行细胞转染实验研究,发现DOC-1R转基因表达抑制CHO细胞内中心体复制.

目录

英文缩略语

第一部分CDK2蛋白质序列与其入核转运过程关系的初步分析

前 言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结 论

参考文献

第二部分一种原位示踪外源目的基因表达载体的构建

前 言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

第三部分间接免疫荧光技术验证DOC-1R基因表达抑制DNA复制过程

前 言

实验材料

实验方法

实验结果

讨 论

结 论

参考文献

第四部分间接免疫荧光技术验证DOC-1R基因表达抑制中心体复制过程

前 言

实验材料

实验方法

实验结果

讨 论

结 论

参考文献

本研究创新点

致 谢

综 述

个人简历

在学期间发表论文及获奖情况