喉癌p53基因突变和STK15基因过表达与中心体异常相关性研究

摘要

中心体是哺乳类细胞主要的微管组织中心.它通过在细胞分裂时建立双极纺锤体、在有丝分裂期执行精确的染色体分离而保持基因组稳定.中心体复制周期的异常会导致单极或多极纺锤体的形成,后者一直被认为是染色体不稳定和肿瘤发生的原因.许多类型的肿瘤有这样一个特点,即大部分细胞有中心体异常,后者也被证明出现于肿瘤发生的早期阶段且随肿瘤进展.肿瘤中心体扩增与许多遗传改变相关,包括p53基因突变和STK15基因过表达.在几乎所有人类肿瘤中都检测到了p53基因突变.在多数肿瘤中最常见的点突变发生于外显子5~8,在人喉鳞状细胞癌(LSCC)中亦如此.然而,对LSCC内含子突变研究却很少.内含子突变可以通过引起剪接异常或关键性DNA-蛋白反应中断而影响基因调控.内含子的嘧啶富集区[thepolypyrimidine(py)tract]和支点一致序列(the branch point consensus sequence)中的任何突变都将通过干扰剪接体组装效率和mRNA前体(premRNA)的剪接直接影响剪接过程.p53蛋白功能受损将导致中心体异常,此过程可能通过p53蛋白的转激活-非依赖性(transactivation-independent)方式介导STK15蛋白过表达完成.STK15(也称BTAK,Aurora-A)是人类丝氨酸/苏氨酸激酶15/胸部肿瘤扩增激酶,它对染色体分离和中心体功能都至关重要.在多种肿瘤中STK15基因都出现扩增,其转录本也有高表达.STK15过表达诱导中心体数目增多,异倍体形成和细胞转化.为探讨p53基因内含子突变及其对p53蛋白表达的影响,以及p53基因突变和STK15基因异常表达相关性与喉癌中心体异常的关系,该研究应用PCR-SSCP银染结合DNA测序和Western Blot,检测了55例喉鳞癌患者的新鲜或冰冻肿瘤组织及配对正常组织的p53基因外显子7、8(p53E7和p53E8)、内含子7、8(p53I7和p53I8)的突变,及p53蛋白表达情况;同时对相同的55例配对标本用半定量RT-PCR方法检测STK15基因的表达情况;并结合实体瘤培养,对上述55例配对标本冰冻切片及实体瘤细胞用免疫荧光方法检测喉癌中心体扩增情况.该研究为探索喉癌发生机理,早期诊断和治疗提供了科学依据.

目录

英文缩略语

前 言

实验材料与方法

实验结果

讨 论

结 论

本研究新见解

参考文献

致 谢

综 述

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