不同培养条件对牛体外受精早期胚胎体外发育的影响研究

摘要

本研究利用屠宰黄牛卵巢，对卵巢表面2～8mm卵泡卵母细胞经体外成熟、体外受精后的早期胚胎，与不同的体细胞共培养及在有不同添加物的胚胎培养液中的后续发育进行了研究，并探讨了其影响因素，以期筛选出最佳的体外培养条件，结果显示： 1.牛体外受精后早期胚胎与颗粒细胞和输卵管上皮细胞共培养有助于胚胎的体外发育。尽管卵裂率与对照组均无显著差异(P＞0.05)，但桑葚胚率均显著高于对照组(P＜0.05)；与输卵管上皮细胞共培养组的囊胚率显著高于对照组(P＞＜0.05)，而与颗粒细胞共培养组的囊胚率与对照组无显著差异(P＞0.05)；试验组的孵化囊胚率(14.2％和17.3％)均极显著高于对照组(0％)(P＜0.01)；试验组之间的卵裂、桑椹胚、囊胚率均未出现差异(P＞0.05)。 2.比较了牛体外受精胚胎基础培养液中添加5％和10％FBS后，对胚胎后续发育的影响，结果显示添加10％FBS组的卵裂率显著高于不添加血清的对照组(P＞＜0.05)，但与添加5％FBS组的卵裂率差异不显著(P＞0.05)，甚至以添加5％FBS组较高；囊胚率显著高于对照组和5％FBS添加组(P＜0.05)；对照组未出现孵化囊胚，试验组均出现孵化囊胚，且10％添加组(14.2％)显著高于5％添加组(3.7％)(P＜0.05)，这表明胎FBS对牛早期胚胎发育有促进作用，以10％添加量为最佳。 3.探讨了添加不同浓度的牛磺酸对牛IVF后胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响并比较了胚胎的不同发育阶段添加牛磺酸对胚胎的后续发育情况。基础培养液(对照组)中分别添加7和14mM的牛磺酸(试验组)后，其卵裂率、桑椹胚率分别为90.0％、89.6％和48.1％、47.4％均与对照组无显著差异(P＞0.05)；添加7mM牛磺酸组的囊胚率(26.4％)显著高于对照组(21.0％)和添加14mM组(22.3％)(P＜0.05)；试验组与对照组孵化囊胚率分别为21.8％、18.7％和14.2％，差异不显著(P＞0.05)，而囊胚总细胞数显著高于对照组(P＜0.05)。IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期，在基础培养液中分别添加7mM的牛磺酸时，桑椹胚率分别为48.7％、57.1％、52.0％，囊胚率分别为25.1％、30.7％、27.9％，孵化囊胚率分别为25.9％、28.6％、25.0％；而添加14mM牛磺酸组时，桑椹胚率分别为50.4％、56.4％、55.4％，囊胚率分别为26.5％、31.3％、27.7％，孵化囊胚率分别为27.5％、31.1％、29.9％。结果表明，当体外发育培养液中添加牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率(P＜0.05)，并且在4～8细胞期添加牛磺酸最为合适。 4.牛IVF后早期胚胎体外发育时向其基础培养液(对照组)中加入50和100μM的β-ME(试验组)，其桑椹胚率分别为48.1％和47.4％，囊胚率分别为26.4％和22.3％，均极显著高于对照组的桑葚胚和囊胚率(43.2％、21.0％)(P＜0.01)；孵化囊胚率分别为16.2％和17.0％与对照组(14.2％)差异不显著(P＞0.05)；囊胚总细胞数也均无显著差异(P＞0.05)。IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期，在基础培养液中分别添加50μM的β-ME时，桑椹胚率分别为52.2％、58.2％、54.8％，囊胚率分别为25.8％、31.8％、29.3％，孵化囊胚率分别为16.2％、16.0％、17.4％，桑葚胚率、囊胚率均与对照组(43.2％、21.0％)差异显著(P＜0.05)，而孵化囊胚率与对照组(14.2％)差异不显著(P＞0.05)；而添加100μM的β-ME时，桑椹胚率分别为51.5％、57.4％、57.2％，囊胚率分别为26.1％、32.6％、30.3％，孵化囊胚率分别为15.7％、13.8％、16.4％，桑葚胚率、囊胚率均显著高于对照组(P＜0.05)，而孵化囊胚率与对照组也无显著显著(P＞0.05)；明显可以得出4～8细胞期添加β-ME可显著提高胚胎桑葚胚和囊胚发育率，但不能改善孵化囊胚的质量。

目录

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摘要

第一部分文献综述

第二部分试验研究

结束语

参考文献

附图

致谢

攻读学位期间发表的论文