蛋白激酶A的调节亚基RIα和RⅡ在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

摘要

蛋白激酶A(PKA)为一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，存在于细胞内，在cAMP依赖下PKA可以磷酸化多种靶蛋白上的丝氨酸和苏氨酸残基，从而激活一系列的底物蛋白发挥信号传导作用。在细胞的代谢，增殖，分化及凋亡、癌变过程中发挥重要作用而成为研究热点。PKA的分子是由2个调节亚基和2个催化亚基构成的异四聚体，根据调节亚基RⅠ和RⅡ的差异，PKA分为2个亚类为PKAⅠ与PKAⅡ。PKAⅠ在肿瘤细胞和暴露于有丝分裂原刺激下的细胞中大量表达，他参与调节EGF和TGFα介导的有丝分裂信号传导途径；PKAⅡ主要在非增殖期的正常细胞及处于生长抑制的细胞中表达，它可以抑制有丝分裂信号传导和肿瘤细胞的生长[1]。试验证明，RⅠα在卵巢癌，肺癌，结肠癌和胰腺癌组织中均呈过度表达。为此，我们用免疫组化法检测膀胱癌组织RⅠα和RⅡ的表达情况，旨在探讨他们与膀胱移行细胞癌临床病理因素之间的关系。 材料与方法一、标本选择收集我院2003年初次诊断的原发膀胱移行上皮癌石蜡包埋标本48例。男性35例，女性13例。年龄23～81岁(平均54岁)。依WHO标准进行肿瘤细胞分级：G1级21例，G2级19例，G3级8例。按UICC-TNM标准进行临床分期：T1期16例，T2期19例，T3期13例。另取12例正常膀胱粘膜组织做为正常对照组。 二、主要试剂抗PKA的RⅠα单克隆抗体购自德国Merck公司，抗PKA的RⅡ多克隆抗体购自美国Epitomics公司。SP标准免疫组化试剂盒和DAB显色剂购自福州迈新生物技术有限公司。 三、实验方法免疫组化方法采用常规S-P法：采用免疫组织化学S-P法进行组织染色，各步骤间严格控制温度与时间. 1.石蜡切片常规二甲苯脱蜡。 2.100％，95％，85％，75％酒精水化。 3.高温高压抗原修复。 4.滴加A液3％过氧化氢，室温10分钟。 5.PBS冲洗三次，每次5分钟。 6.B液10％正常山羊血清，37℃孵育20分钟。 7.去血清滴加一抗，4℃过夜。 8.PBS冲洗三次，每次5分钟。 9.C液生物素标记的二抗工作液，37℃孵育30分钟。 10.PBS冲洗三次，每次5分钟。 ¨.D液链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶溶液，37℃孵育30分钟。 12.PBS冲洗三次，每次5分钟。 13.DAB显色。 14.苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明。 15.中性树胶封片。 四、统计学处理采用SPSS11.5分析软件进行统计学处理。应用X2检验分析RⅠα、RⅡ表达与临床病理行为的关系，组间吸光度分析采用SNK法多重比较，两个指标间的相关性分析及吸光度法与传统半定量法评估标本染色之间比较采用Spearman相关性分析方法。 结果一、RⅠα主要位于膀胱移行上皮及癌细胞的胞浆中，呈棕黄色或褐色颗粒，染色比较强，而间质不着色。RⅡ在膀胱癌细胞中不着色，而在间质组织(如血管平滑肌胞浆等)中呈淡黄色染色。正常膀胱组织中，PKA的RⅠα亚基的阳性表达率为16.67％(2/12)，显著低于膀胱移行细胞癌组织的95.83％(46/48)。而RⅡ亚基在正常膀胱组织中的表达的阳性率为75％(9/12)，在膀胱移行细胞癌组织中的阳性率为50％(24/48)。 二、根据阳性细胞表达比例，将表达结果分为-～++++5个等级。其中0为-，＜25％为+，25％～50％为++，50％～75％为+++，＞75％为++++。再将-～++为低表达组，++～++++为高表达组。计算高表达组的百分比，G3～G2(88.89％)，G1(38.10％)，T2～T3(81.25％)，T1(31.25％)。 三、测量对照组和肿瘤组各级、各期RⅠα染色切片的吸光度值，计算平均值，对照组为10.10±6.57，T1组为19.00±10.03，T2组为26.82±8.65，T3组为33.87±6.05；G1组为20.70±9.63，G2组为27.85±8.89，G3组为36.24±4.20。 结论1.蛋白激酶A的RⅠα亚基有促进膀胱移行细胞癌的发生和发展作用，是低分化侵袭性膀胱移行细胞癌的重要特征。 2.RⅠα的促癌途径与RⅡ亚基的表达不相关。 3.RⅡ的表达与膀胱癌的发生不相关。

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综 述蛋白激酶A与上皮生长因子受体在细胞生长分化中的作用研究进展

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