通过RNA干涉（RNAi）阻止免疫应答前狂犬病病毒感染的研究

摘要

本研究利用siRNA的干涉作用研究特异性siRNA对狂犬病病毒复制的抑制作用。针对翻译狂犬病病毒糖蛋白(G)和核蛋白(N)的mRNA各设计出3对特异的siRNA的转录前体-小DNA分子，合成后克隆到载体pSiencer2.1-U6中，经测序成功获得了转录载体。然后将转录载体转染BHK-21细胞。采用稳定转染和瞬时转染两种方式。获得稳定转染的BHK-21细胞后，按1％比例接种狂犬病病毒8202，48h后采用直接免疫荧光和RT-PCR检测狂犬病病毒的复制情况，结果表明：N19对狂犬病病毒复制的干扰效果最好；G69次之；G18、G21起到了一些干扰作用，但效果不明显；N35、N38没有干扰效果。瞬时转染时同步接毒，48h后同样采用直接免疫荧光检测狂犬病病毒的复制情况，结果表明：瞬时转染时siRNA的干扰效果不理想。将稳定转染后的BHK-21-G69、BHK-21-N19细胞的裂解物和转录载体pSiencer2.1-U6-siRNA-G69、pSiencer2.1-U6-siRNA-N19分别注射接种过狂犬病病毒的小鼠，注射细胞裂解物小鼠的死亡率与只接种狂犬病病毒的小鼠的死亡率无明显差别；注射转录载体小鼠的死亡率明显低于只注射狂犬病病毒小鼠的死亡率，说明siRNA的转录载体释放出的siRNA可以在小鼠体内阻止狂犬病病毒的复制。

目录

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摘要

英文符号缩写表

第一章前言

第二章干扰狂犬病病毒复制的siRNA转录载体的构建

第三章细胞干扰模型的构建及siRNA在细胞水平干扰狂犬病病毒复制的研究

第四章siRNA阻止狂犬病病毒感染小鼠的研究

结论

参考文献

附录

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文