转化生长因子-β2对培养的小鼠视网膜干细胞的诱导分化作用的研究

摘要

目的：观察TGF-B<,2>(Transforming Growth Factor-B<,2>)是否能诱导体外培养的小鼠视网膜干细胞(Retina Stem Cell，RSC)的分化；并以胎牛血清为对照，观察其对视网膜干细胞诱导分化作用的强弱。 方法 1、RSC的分离培养及鉴定孕龄17 d(天) 的昆明小鼠处死，取出胚胎，迅速剖出胎鼠的眼球，在手术显微镜下分离视网膜干细胞并进行培养，传代，完成第六代传代后，进行视网膜干细胞的Nestin和CHX-10免疫荧光鉴定。 2、RSC的诱导分化及鉴定将第六代细胞离心，冲洗，重新接种于培养瓶，然后进行诱导分化，分为10％胎牛血清诱导分化组，TGF-B<,2>(10ngPml)诱导分化组，和空白对照组。并进行抗GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein)、抗Opsin、抗B-tubulinⅢ、抗PKC(Protein Kinase c)免疫荧光染色，鉴定终末细胞。 3、荧光显微镜下观察结果在荧光显微镜下随机数10个非重叠视野(×20)，计算抗GFAP、抗Opsin、抗B-tubulinⅢ、抗PKC阳性细胞占总细胞数的比例，即：阳性细胞率。采用统计学分析方法，比较不同条件诱导分化的终末细胞的阳性率是否具有统计学差别。观察不同的诱导条件对视网膜干细胞诱导分化作用的强弱。 结果 1、体外培养的视网膜干细胞团的形态观察及荧光鉴定分离的视网膜干细胞进行培养可形成悬浮生长的细胞团，经多次传代，细胞增殖能力未见衰减。到第6代，培养的细胞生长状况良好，细胞折光性强，细胞团边缘的细胞界限比较清楚。分别对细胞团的Nestin和Chx-10抗原进行荧光染色，Nestin和Chx-10染色阳性表明所培养细胞为胚胎发育早期视网膜内原始细胞。 2、三组分化细胞的荧光检测培养细胞经10％胎牛血清和TGF-B<,2>(10ngPml)诱导可向成熟细胞分化，免疫荧光检测显示分化细胞可分别表达神经胶质细胞、感光细胞、双极细胞以及节细胞的特异性抗原GFAP、Opsin、PKC及B-tubulinⅢ。在未加胎牛血清和TGF-B<,2>的空白对照组仅见极少量的分化细胞。 3、荧光显微镜下观察结果及统计学分析结果DMEM/F12+10％胎牛血清组和DMEM/F12+TGF-B<,2>(10ngPml)组诱导分化后的抗B-tubulinⅢ、抗Opsin、抗GFAP、抗PKC阳性细胞率分别进行比较，行统计学分析，P值均<0.05，具有统计学差异。 结论 1、TGF-B<,2>(10 ngPml)和10％胎牛血清均能够诱导体外培养的小鼠视网膜干细胞分化为视网膜细胞。 2、TGF-B<,2>(10 ngPml)对视网膜干细胞的诱导分化作用强于单独的10％胎牛血清诱导。

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综述 视网膜色素变性的视网膜移植治疗

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