病理性瘢痕组织中CXCL10/IP-10和CXCL9/MIG的表达及意义

摘要

实验目的：
　　 瘢痕是人体在组织创伤修复过程中的必然产物，任何创伤的愈合均伴有不同程度的瘢痕形成，根据其组织学和形态学区别，可分为四类：表浅性瘢痕、萎缩瘢痕性、增生性瘢痕，瘢痕疙瘩。其中增生性瘢痕（hypertrophic scar，HTS）和瘢痕疙瘩（keloid，K）又统称为病理性瘢痕（pathological scars）。病理性瘢痕是临床上的常见病症，病因不明确，病变持续增长、易复发、反复破溃可形成瘢痕癌。影响美观及功能。目前尚无有效的预防和治疗方法。病理性瘢痕的发生发展涉及众多方面，错综复杂，是各种细胞及细胞因子相互作用、调控的结果是一种多种细胞因子参与、受多因素影响的病理过程，且缺乏可行的动态动物模型，对病理性瘢痕进一步的研究受到限制。因此。病理性瘢痕形成的具体机理仍不清晰。本研究从目前日益受到重视的瘢痕形成机制的免疫学假说出发，首次研究Th1趋化因子--干扰素诱导蛋白10（CXCL10/IP-10）和干扰素诱导单核因子（CXCL9/MIG）在病理性瘢痕中的表达情况，以探讨CXC族免疫相关的Th1趋化因子在病理性瘢痕组织发病机制中的作用。
　　 实验方法：
　　 瘢痕疙瘩患者28例为K组，男性12例，女性16例，年龄9-35岁，平均18.6岁，病程6月～3年（平均8.3月），瘢痕分布于前胸13例、肩部12例、耳廓3例。增生性瘢痕患者34例为HS组，男性19例，女性15例，年龄7～42岁，平均21.4岁，病程6月～3.5年（平均10.6月），瘢痕分布于面颈部16例、四肢15例、胸部3例。瘢痕表面无破溃及感染，术前未行激光、冷冻、外用或局部注射药物等任何治疗，患者无皮肤、免疫及传染性疾病。同时选取其他整形美容手术患者切除的正常皮肤组织20例，作为对照组，记为N组。将新鲜组织置于冰盒内转运到实验室，标本经OCT包埋，深低温冰箱（-80℃）冷冻保存，实验前制作切片，切片厚5μm。取瘢痕疙瘩28例、增生性瘢痕34例、正常皮肤20例组织切片，贴于明胶载玻片上，室温丙酮固定30min，干燥30min后，PBS冲洗3次（3min/次）；再经3％过氧化氢阻断内源性过氧化物酶处理10 min，PBS冲洗3次，免疫血清阻断非特异性抗原10 min后，每个标本分别加30μl-抗即IP-10或MIG（1:100稀释）：4℃湿盒过夜，PBS冲洗3次后，滴加1:200稀释生物素化二抗；37℃恒温水箱孵育20min，PBS冲洗3次，滴加1:200稀释ABC复合物即三抗；37℃恒温孵育20min，PBS冲洗3次，滴加50μl的AEC染液复染，镜下观察控制染色效果，染色时间5～10min，自来水洗净，室温晾干；苏木精复染3～5s；用流水冲洗30min，氨水反蓝。阴性对照组用PBS缓冲液代替一抗。封片，保存，镜下观察，照相。结果判断标准：IP-10和MIG着色后，细胞浆中可见染成红色、粉红色的结构，记为阳性细胞，若不见红染结构即为阴性细胞。每例标本各取10个高倍视野（×400）计数，双人双盲统计阳性细胞占同类细胞总数的百分率（阳性率）和阳性细胞的染色强度，并据此分类：①阳性率<10％，为阴性（-）。②阳性率10％-30％，胞浆染色呈淡红色，为（+）。③阳性率30％-60％，胞浆染色呈红色，为（++）。④阳性率>60％，胞浆染色呈深红色，为（+++）。采用SPSS11.5统计软件进行X2检验。统计分析，取α=0.05，即.P<0.05时认为有统计学意义。
　　 实验结果：
　　 一、IP-10和MIG在病理性瘢痕组织中的定位
　　 IP-10和MIG弥漫性分布于真皮内成纤维细胞，局部分布于表皮内角质形成细胞中，呈颗粒状，突出定位于细胞浆内。
　　 二、IP-10和MIG在成纤维细胞中的表达及对比
　　 IP-10和MIG在K、HS组中呈高表达，与N组比较其差异具有统计学意义（P<0.05），但K、HS组之间比较其差异无统计学意义（P>0.05）。
　　 结论：
　　 IP-10和MIG可能通过趋化Th1淋巴细胞定向迁移引发一系列免疫炎性反应，促进病理性瘢痕的形成。

目录

文摘

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前言

实验材料和方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述

参考文献

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