NK细胞的分离纯化及杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关研究

摘要

目的：
　　 1、通过相对简单的方法分离纯化人外周血NK细胞,对纯化条件进行优化,并进行培养,建立一种经济高效的NK细胞纯化、培养及鉴定的方法；
　　 2、检测NK细胞对不同肿瘤细胞的杀伤活性,为NK细胞的临床应用提供实验基础；
　　 3、探讨NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性,为提高NK细胞的杀伤敏感性提供基础。
　　 方 法
　　 1、人外周血NK细胞的分离纯化及检测
　　 补体裂解法、单抗铺皿法、percoll不连续密度梯度离心法、RosetteSep(R)富集法分离人外周血NK细胞,流式细胞术检测NK细胞的纯度,对几种方法进行比较和优化；
　　 2、NK细胞杀伤活性的检测
　　 采用CCK-8法检测不同效靶比时NK细胞对白血病细胞K562、肾癌细胞769-P、乳腺癌细胞Bcap37、肺癌细胞A549的杀伤活性。
　　 3、肿瘤细胞表面MC加的表达
　　 采用流式细胞术检测人白血病细胞K562、肾癌细胞769-P、乳腺癌细胞Bcap37及肺癌细胞A549表面MICA/B的表达。
　　 结 果
　　 1、NK细胞的分离纯化
　　 单抗铺皿法、补体裂解法、percoll不连续密度梯度离心法分离NK细胞的纯度分别为(30.90±2.35)％、(42.59±4.01)％、(60.02±3.25)％,RosetteSep(R)直接法及改进法分离NK细胞的纯度分别为(95.39±3.87)％、(96.52±2.42)％.
　　 2、NK细胞对肿瘤细胞的杀伤率
　　 NK细胞对同一肿瘤细胞的杀伤活性,在不同效靶比之间,差异有显著性(P<0.01)；在同一效靶比时,NK细胞对K562、Bcap37及769-P的杀伤活性较强,与A549相比有显著性差异(P<0.01),其中K562与Bcap37之间无显著性差异(P>0.05)。
　　 3、肿瘤细胞表面MICA/B的表达
　　 K562、Bcap37、769-P及A549细胞表面MICA/B的表达阳性率分别是(60.35±0.50)％、(90.72±0.64)％、(55.59±0.55)％、(3.84±0.10)％。
　　 4、NK细胞杀瘤活性与MICA/B表达的相关研究
　　 在效靶比为5:1、10:1、20:1时,K562、Bcap37、769-P及A549细胞表面MICA/B的表达与NK细胞的杀瘤活性均呈正相关关系(P<0.05)；对同一肿瘤细胞,随着效靶比增加,相关性增强。
　　 结 论
　　 1、对NK细胞的几种纯化方法进行比较,其中RosetteSep(R)改进法可以获得高纯度的NK细胞,是一种经济,快速简便,并且纯化率高的分离方法；
　　 2、NK细胞的杀伤敏感性与肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平相关,肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平影响NK细胞的杀伤活性。

目录

文摘

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英文缩略语

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述

参考文献

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