CCR7通过Rac介导人CCR7高表达SCCHN细胞侵袭的实验研究

摘要

实验目的：
　　 头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)指发生于口腔、咽、喉、鼻腔、鼻窦、唾液腺、颈段气管及食管的鳞状细胞癌,其组织来源于上呼吸消化道的粘膜上皮细胞。由于SCCHN具有局部浸润生长、易原位复发及远处转移的特点,其发病率及死亡率较高,目前其治疗仍然是一个富有挑战性的临床课题。趋化因子受体CCR7为七次跨膜的G蛋白耦联受体,是CC类趋化因子受体的成员之一,在淋巴细胞及树突状细胞的归巢中起重要作用,并且与多种人类肿瘤的淋巴结转移相关。CCR7可被两种配体激活,即CCL21(SLC)和CCL19(ELC)。上述激活方式源于这两种配体可以重组肌动蛋白微丝、钙的流通、MAPK和激活Erk/2,并直接导致细胞朝着趋化因子的方向侵袭。
　　 Rac亚家族包括Rac1、Rac2、Rac3、Rac1b、RhoG等,是RhoGTP酶(又称小G蛋白)的一个亚家族,它和Cdc42和RhoA等共同构成Ras单体GTP酶超家族——Rho超家族。Rac、Cdc42和Rho均参与调控肌动蛋白骨架的重组、细胞粘附、细胞分裂、核反应和介导有丝分裂信号通路等细胞过程。在细胞迁移过程中Rac和PI3K之间的关系更加微妙:两者之间可以直接相互影响,并且Rac的激活可刺激P13K形成PI(3,4,5)P3。
　　 由于PI3K/Akt通路与趋化受体等七跨膜受体有关联,而Rac又参与调控肌动蛋白骨架的重组、细胞粘附、细胞分裂、核反应和介导有丝分裂信号通路等细胞过程,然而Rac与趋化受体因子在PI3K/Akt通路中有什么必然的联系吗?我们在以往的文献中似乎找不到确切的结论。那么在本研究中我们就假设Rac是SCCHN细胞中PI3K/Akt通路中CCR7的下游信号分子,且Rac可明显调控CCR7所诱导的头颈部鳞状细胞癌的细胞迁移、肌动蛋白重组及蛋白表达。本研究意在证明Rac参与调控CCR7及其在头颈部鳞状细胞癌迁移过程中的作用。
　　 实验方法：
　　 1.Western blot方法检测细胞内Rac的蛋白表达。
　　 2.免疫荧光染色:应用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变。
　　 3.Transwell趋化小室法检测细胞体外侵袭能力的改变。
　　 4.甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测加入影响因素前后细胞增殖的改变。
　　 实验结果：
　　 1.CCL19诱导增高PCI-37B细胞内的Rac活化蛋白水平。
　　 CCL19的诱导明显增加了磷酸化(活化)Rac的蛋白水平的表达(P＜0.05),而分别采用了CCR7mAb,LY294002及Rac抑制剂处理细胞后,CCL19的诱导不能增加Rac的磷酸化水平,与对照组没有明显差别,也明显低于CCL19诱导组。
　　 2.W56降低了CCL19诱导产生的F-actin极性浓聚。
　　 CCL19诱导使SCCHN细胞的细胞前部片状伪足形成,肌动蛋白集合。而上述聚合现象又被两种不同浓度W56预处理所阻断,板状伪足逐渐变成丝状伪足,肌动蛋白被降解。上述结果显示阻断Rac的活性可以明显降低CCL19诱导所产生的F-actin极性浓聚。
　　 3.W56减弱了CCL19诱导所产生的PCI-37B细胞的侵袭活性
　　 W56明显减弱了CCL19诱导所产生的SCCHN细胞的侵袭活性,Rac可能在CCL19诱导、CCR7/PI3K介导的SCCHN侵袭信号中扮演重要角色。
　　 4.W56抑制了CCL19所诱导的PCI-37B细胞的增值率的增高。
　　 CCL19诱导后细胞增殖率比对照组明显增高(P＜0.05);Rac对CCL19诱导所产生的SCCHN细胞的侵袭活性增加有明显的抑制作用(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 在PCI-37B细胞中,Rac参与CCL19诱导、CCR7/PI3K信号通路介导的PCI-37B细胞肌动蛋白细胞骨架极性浓聚、侵袭能力和细胞增殖的过程中。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略词

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 Rac在肿瘤方面的研究进展

在学期间科研成绩

致谢

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