JDP2(Jun dimerization protein2)与人胰腺癌EMT之间关系的研究

摘要

前言：
　　 胰腺癌是一种发病隐匿、进展迅速、治疗效果及预后极差的消化道恶性肿瘤。患者诊断为胰腺癌后5年生存率小于5%。这种极差的预后主要与其发生早期微转移及患者临床症状不显著有关。因此,探索新的胰腺癌的分子标志物对于胰腺癌的治疗具有重要意义。
　　 Epithelial-to-mescnchymaltransition(EMT)是上皮细胞呈现间质细胞的形态。上皮细胞形成EMT主要标志有如:上皮标志物E-cadherin表达的降低以及间质标志物vimentin、snail及N-cadhedn表达的升高。在典型的EMT的模型中,细胞与细胞之间失去极性,呈现出典型的形态学改变。形成EMT的细胞表现出更强侵袭能力。越来越多的证据证明EMT与多种生长因子有关,如转移生长因子(TGF-β1),表皮生长因子(EGF)等。但是,EMT形成的机制到目前为止还不是非常明确。
　　 Jundimerizationprotein2(JDP2),作为AP-1类抑制因子之一,最初是作为AP-1成员之一的c-Jun的结合蛋白分离出来的。AP-1是由Jun,Fos或ATF蛋白系列所构成的二聚体,其功能涉及细胞周期调节,细胞分化,凋亡及肿瘤的发生等方面。JDP2由163个氨基酸组成,并含有一个碱性亮氨酸拉链(basicleucinezipper,bZIP)结构。JDP2可以和自身以及c-Jun,JunB,JunD或ATF-2形成二聚体,并抑制Jun,c-Fos和ATF-2等的转录活性,显示JDP2是一种广泛的AP-1抑制蛋白。在深入研究其转录调控机制的过程中,课题组成员发现,JDP2是通过回收HDAC3(histonedeacetylase3)到原癌基因c-jun的调控领域的方式来抑制其表达。
　　 目的：
　　 研究JDP2与人胰腺癌EMT之间的关系。通过探讨JDP2与人胰腺癌EMT之间的关系来找到可能的新的胰腺癌早期治疗、诊断的靶点。
　　 方法：
　　 我们选择36例自2000年2月至2003年11月在中国医科大学附属第一医院手术切除胰腺癌标本。BxPC3细胞用含10%FBS的RPMI1640培养,同时在培养基中加入EGF(100ng/ml)以及TGF-β1(10ng/m1),之后用pCEFL-HA-JDP2质粒瞬时转染上述BxPC3细胞。pGEX-ATF2质粒被瞬时转染至Capan2胰腺癌细胞系中,48小时后继续用TGF-β1(10ng/ml)诱导48小时。如上细胞均经Westernblot、RT-PCR、qRT-PCR、transwell侵袭实验、MTT及免疫荧光检测。
　　 结果：
　　 为了验证JDP2的表达与胰腺癌之间的关系,我们应用Westernblot检测36胰腺癌标本癌和癌旁的JDP2蛋白表达,结果证明所有癌组织的JDP2表达明显低于癌旁组织。我们还发现TGF-β1联合EGF共同诱导可使BxPC3细胞产生EMT.而这种EMT可以被过表达的JDP2所逆转。而过表达ATF2的Capan2细胞对TGF-β1的刺激变得更加敏感,产生EMT.
　　 结论：
　　 我们的研究证明手术后的病人生存时间与JDP2的高表达呈密切相关。我们也证明TGF-β1联合EGF共同诱导可使BxPC3细胞产生EMT,而JDP2可以逆转该EMT。ATF2高表达的Capan2细胞可以使得TGF-β1的刺激变得更加敏感,产生EMT-因此,JDP2具有明显抑制EMT的作用,转染后的胰腺癌细胞系可以明显抑制由TGF-β1诱导的EMT,这使得JDP2有可能成为新的胰腺癌的靶向治疗因子。