RGD肽修饰的壳聚糖水凝胶支架与大鼠颌下腺细胞体外复合培养的实验研究

摘要

目的:
　　 研究RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架(chitosan/hydrogel scaffolds by animmobilized RGD peptide)对大鼠颌下腺细胞(Rat submandibular gland cellsRSGCs)粘附、增殖、分泌作用的影响。
　　 方法:
　　 应用体外组织块法原代培养3d龄SD大鼠的颌下腺细胞，免疫荧光法鉴定细胞来源、胰酶消化法和差速贴壁法纯化细胞、传代扩增。冻干技术制作壳聚糖水凝胶支架并以RGD肽修饰用于实验组，不含RGD肽的壳聚糖水凝胶支架用于对照组。两者支架的规格为4mmx4mmx2mm。将浓度为2.0×105个/ml的第二代大鼠颌下腺细胞悬浊液接种于RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架为实验组进行培养;将浓度为2.0×105个/ml的第二代大鼠颌下腺细胞悬浊液接种于不含RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架为对照组进行培养。
　　 测定实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞的粘附率。MTT法检测接种后实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞增殖情况。扫描电镜观察接种的大鼠颌下腺细胞在支架上生长的超微结构。测定1d-7d培养复合物上清液中淀粉酶含量，检测实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞分泌功能。采用SPSSfor windows13.0统计分析软件对结果进行方差分析，检验水准α=0.05，P＜0.05有统计学意义。
　　 结果:
　　 将纯化扩增的大鼠颌下腺细胞分别与RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架和不以RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架复合培养。细胞粘附率检测:实验组粘附率高于对照组，2h、24h时P＞0.05;2h、4h、8h、12 h时P＜0.05。细胞增殖结果显示（MTT法）:接种后1d，实验组细胞数量略大于对照组(P＞0.05)，而3d-9d，两组支架上的细胞数量有显著性差异(P＜0.05)，实验组优于对照组。细胞上清液中淀粉酶含量检测:两组大鼠颌下腺细胞上清液的淀粉酶分泌量均有不同程度的增加，从3d-7d实验组优于对照组，淀粉酶含量差异有统计学意义(P＜0.05)。扫描电子显微镜观察:在RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架上，植入初期大鼠颌下腺细胞成圆形，散在的粘附RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架网孔内，实验组突起较少，对照组突起较少;随着时间的延长，实验组大鼠颌下腺细胞呈多角形、带有多个突起，细胞表面凹凸不平，对照组突起数量和细胞表面没有实验组明显。
　　 结论:
　　 以RGD多肽修饰的壳聚糖水凝胶支架对大鼠的颌下腺细胞的粘附、增殖、分泌有促进作用。

目录

声明

摘要

英文缩略语

论文

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述

在学期间科研成绩

致谢

个人简介