年轻恒牙根尖周炎和再生性牙髓治疗根管内间充质干细胞的检测及组织学观察

摘要

目的：
　　再生性牙髓治疗(regenerative endodontic treatment，RET)是年轻恒牙牙髓感染或坏死的一种新的治疗选择。临床研究表明RET相对于传统根尖诱导成形术，能使牙根长度和根管壁厚度显著增加。但有关RET的机制研究相对少。作为再生医学的一种，RET基于组织工程三要素:干细胞，生长因子和支架。血块中的纤维蛋白为潜在的干细胞提供了支架，在来自血小板或者牙本质中的生长因子的作用下，干细胞增殖分化，参与硬组织形成。
　　正常生理状态下，干细胞位于血管周围的龛(niche)中，处于相对静止状态。干细胞会随着血流，向某个特定的解剖位置迁移;或当组织受损时，周围健康组织龛中的干细胞被招募到组织受损处，称为细胞归巢(cell homing)。干细胞大量增殖，向多种组织形态分化，进而参与组织修复再生。炎症与干细胞之间也有复杂的相互作用，两者的共同作用决定损伤和修复的平衡。
　　本研究用比格犬制造年轻恒牙根尖周炎动物模型，采用免疫荧光染色技术，检测根尖周炎以及RET中根管内间充质干细胞的表达，明确参与RET的干细胞除了来自刺破根尖出血以外，是否有其他来源，并通过对根尖周炎和RET治疗后患牙的组织学观察，探寻干细胞“归巢”参与RET组织修复的机制。
　　材料和方法：
　　选择三只6月龄的比格犬，每只犬双根前磨牙10颗，共30颗牙，60个根管。其中18颗用于免疫荧光检测，12颗用于组织学观察（其中1颗由于炎症，脱落）。
　　免疫荧光检测设正常对照组，根尖周炎组、RET组（分为RET-0，RET-1，RET-2组）以及明胶海绵组（分为Gelfoam-1，Gelfoam-2组），每组3颗牙。RET-0组在刺破根尖周时取进入根管内的血液，不拔牙。RET-1、RET-2分别在常规RET后1周、2周拔牙，劈牙，取根管内容物。明胶海绵组，在封抗生素糊剂炎症控制后，不刺破根尖周组织，而是在根管内放明胶海绵，使之接触到根尖部，Gelfoam-1、Gelfoam-2组分别为放明胶海绵后1周、2周拔牙，劈牙，取根管内容物。所有样本的PBS冲洗液经甩片后，用免疫荧光标记STRO-1和CD105，荧光显微镜下观察。应用SPSS13.0软件包，采用Mann-Whitney U检验进行统计学分析比较各组的阳性细胞分级的差异，检验水准以P＜0.05为具有显著性差异。
　　组织学观察，设正常对照组，根尖周炎组，RET组和空根管组，每组各3颗牙。术后1个月、2个月和3个月拍X线片观察牙根继续发育情况。3个月后全麻下处死动物，灌流固定，组织脱钙，包埋，HE染色，进行镜下观察。
　　结果：
　　免疫荧光染色结果表明正常发育的犬年轻恒牙牙髓中可检测到少量间充质干细胞的表达;根尖周炎时根管内有大量间充质干细胞;进行RET在刺破出血即刻，以及RET后1周、2周，根管中都可检测到间充质干细胞标记物的表达;即使在根管封抗生素糊剂控制炎症后，根管内放入明胶海绵支架组也可检测到两种间充质干细胞标记物的表达。根尖周炎组的STRO-1和CD105的阳性表达高于正常对照组，统计学上有显著性差异，U=0.000，P=0.025。STRO-1和CD105的阳性表达在RET-0与RET-1组，RET组与Gelfoam组之间无显著性差异（P＞0.05）。
　　组织学观察表明根尖周炎组可见大量免疫细胞，无显著组织修复;消炎后的空根管组，根管内仅有纤维性修复;RET后有新的软硬组织形成，根管壁增厚，牙根增长，根尖孔闭合。
　　结论：
　　年轻恒牙根尖周炎和再生性牙髓治疗时存在间充质干细胞进入根管的现象;再生性牙髓治疗中进入根管中的间充质干细胞不仅来自于因刺破根尖周组织而进入根管内的血液，还可能由根管外组织中的干细胞“归巢”而来。
　　根尖周炎时虽然有大量干细胞进入根管，但是由于炎症环境不利于干细胞发挥其作用，组织形成有限。根管消毒后，根管内可出现一定程度的组织修复。RET刺破出血，造成局部适度的损伤，可能进一步激发了干细胞的增殖和分化，利于形成新生组织。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

第一部分 年轻恒牙根尖周炎和再生性牙髓治疗根管内间充质干细胞的检测

目的

材料与方法

实验结果

讨论

结论

第二部分 年轻恒牙根尖周炎和再生性牙髓治疗后的组织学观察

目的

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 再生性牙髓治疗后新组织形成的研究进展

在学期间科研成绩

致谢

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