雷帕霉素联合CD34抗体复合支架预防再狭窄的实验研究

摘要

第一部分:雷帕霉素联合CD34抗体复合支架的制备及相关特性研究
　　目的
　　制备雷帕霉素联合CD34抗体复合支架，并对其机械性能、坚韧性、药物释放特点及生物相容性能进行检测。
　　方法
　　1、采用层层静电自组装法制备壳聚糖/肝素/CD34(CS/HP/CD34)抗体涂层，然后通过喷涂法制备PLGA/雷帕霉素药物涂层，最后进行支架组装。
　　2、通过电镜及光学显微镜观察支架的物理性能，包括表面形貌，弯曲性能，膨胀性能等，电镜观察涂层生物相容性，并对支架所载药物进行体外释放测定。
　　结果
　　1、成功制备雷帕霉素联合CD34抗体复合支架，并对其物理性能和所载药物释放特点进行评价，其各项观察指标符合支架制备基本要求，弯曲、压握及球囊扩张后涂层覆盖均匀无开裂;通过电镜观察支架表面未见血小板聚集或伪足形成，涂层具有良好的生物相容性。
　　2、支架所载雷帕霉素释放曲线呈线性释放，一定程度克服了市面上同类支架爆发性释放的特点，持续观察60d仍能检测到药物浓度。
　　结论
　　所制雷帕霉素联合CD34抗体复合支架符合冠脉植入支架制作工艺的基本要求，同时具备良好的物理性能及生物相容性，所载抗增殖药物可持续线性释放。
　　第二部分:雷帕霉素联合CD34抗体复合支架捕获干细胞及其特性的研究
　　目的
　　在已对所制雷帕霉素联合CD34抗体复合支架机械性能、药物释放特点及生物相容性能研究基础上，进一步对所设计支架捕获内皮祖细胞能力及其所捕获内皮祖细胞的分化特征进行研究。
　　方法
　　1、通过扫描电镜及间接免疫荧光观察所制支架体外捕获内皮祖细胞情况及其分化特征。
　　2、通过荧光显微镜观察兔耳实验捕获内皮祖细胞情况及支架片段的内皮化程度。
　　结果
　　1、体外模拟内皮祖细胞捕获实验电镜观察:CD34抗体涂层可捕获有直径6-8μm左右的纺锤状细胞，24h时细胞变得充盈饱满。所捕获细胞具有内皮祖细胞的外形特征。间接免疫荧光观察CD34抗体支架表面可见大量VEGFR-2阳性细胞黏附的红色荧光斑点。
　　2、兔耳动脉内皮祖细胞捕获实验免疫荧光观察见抗体涂层支架植入后24h支架大部分被血管内皮细胞所覆盖，48h达到完全覆盖，未见细胞异常聚集。
　　结论
　　1、所制雷帕霉素联合CD34抗体复合支架能特异性快速捕获外周血液中的血管内皮祖细胞，其抗体与基础涂层静电结合牢固，具备良好的耐冲刷性能。
　　2、所制支架植入后48h即可完成血管内皮细胞覆盖，实现了支架快速内皮化，可促进内皮细胞修复。
　　第三部分:动物体内实验评价雷帕霉素联合CD34抗体复合支架的有效性和安全性
　　目的
　　应用小型猪冠脉损伤模型考察雷帕霉素联合CD34抗体复合支架预防ISR的有效性和安全性。
　　方法
　　1、应用小型猪冠脉损伤模型将所制雷帕霉素支架(SES)、CD34抗体支架(GS)和雷帕霉素/CD34抗体支架(HCASES)分别随机植入小型猪的左、右冠状动脉，取术后1h，12h，24h，2d，3d，7d，14d，28d，2m静脉血观察药代动力学特征。
　　2、14d，1m，3m，6m随访造影观察支架输送的性能，支架内血栓及再狭窄情况。
　　3、术后14d，1m时间点经电镜扫描观察早期支架内皮覆盖情况。
　　4、术后1m，3m，6m时间点通过病理形态学及半定量病理积分观察内皮化程度，炎症情况及内膜增生程度。
　　结果
　　1、各组支架具有良好的柔顺性，X线下可视，全部实验动物置入顺利，无意外死亡。SES及HCASES组支架雷帕霉素释放药物浓度在1.55-2.36ng/ml，2m时仍可检测。
　　2、各组支架间早期内皮化程度存在差异，SES组支架内皮覆盖程度弱于GS及HCASES组支架。在支架置入14d时，GS及HCASES组可见梭型内皮细胞覆盖，相对排列规则，SES组内皮覆盖不均匀，细胞间连接不紧密。1m时GS及HCASES组内皮细胞覆盖完整，排列规则;SES组细胞轮廓不规整且细胞排列紊乱，见小圆形的炎症细胞。
　　3、病理切片形态学及计算机测量:在1m，3m，6m时间点SES及HCASES组较GS组管腔面积增加，差异有统计学意义(P＜0.05)，但SES组与HCASES组间LA差异不明显(P＞0.05)。1m，3m，6m时间点观察SES及HCASES组较GS组新生内膜面积及厚度均降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，但SES组与HCASES组间差异不明显(P＞0.05)。同样SES及HCASES组较GS组狭窄率降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，但SES组与HCASES组间狭窄率对比差异不明显(P＞0.05)。
　　4、病理学积分半定量测量显示:损伤积分中SES，GS及HCASES各组支架14d及1m时间点损伤积分无明显差异，3m及6m时间点SES组损伤积分较GS组及HCASES组略高，但差异无统计学意义(P＞0.05)。比较SES，GS及HCASES各组14d、1m、3m和6m时间点内皮化情况，支架植入后14d，1m时GS组及HCASES支架组内皮化分数较SES支架组高，差异有统计学意义（P值＜0.05）;3m时间点观察各组内皮化基本完全，GS组及HCASES支架组内皮化分数较SES支架组略高，差异无统计学意义(P＞0.05)，6m时间点观察各组内皮化完全，各组间内皮化程度无差异。炎症积分情况:比较SES，GS及HCASES各组1m、3m和6m时间点支架周围炎症细胞浸润情况可见植入后1m为炎症反应最显著时期，其中SES组炎症反应最重，HCASES组次之，炎症反应最轻为GS组，差异有统计学意义(P＜0.05)。至3m及6m时间点观察，三组间炎症反应差异不显著(P＞0.05)。
　　结论
　　1、通过小型猪冠脉损伤模型14d-6m随访评价所制雷帕霉素联合CD34抗体复合支架的有效性和安全性可行。
　　2、各组支架间早期（14d及1m时）SES组支架内皮覆盖程度弱于GS及HCASES组，3m各组间内皮覆盖程度差异不显著，6m时各组间内皮化分数无差异。
　　3、在1m，3m，6m时间点SES及HCASES组管腔面积大于GS组，SES及HCASES组新生内膜面积及厚度均低于GS组，SES及HCASES组狭窄率低于GS组。1m时SES组炎症反应最严重，HCASES组次之，炎症反应最轻为GS组，至3m及6m时三组间炎症反应差异不显著。
　　4、所制HCASES支架的壳聚糖/肝素/CD34抗体涂层能在植入后14d可完成内皮覆盖，促进内皮细胞修复;PLGA/雷帕霉素涂层可以抑制增殖并降低炎性反应，无支架内再狭窄，生物相容性良好，为进一步深入研究及临床应用奠定基础。

目录

声明

摘要

英文缩略语

论文一 雷帕霉素联合CD34抗体复合支架的制备及其相关特性研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

论文二 雷帕霉素联合CD34抗体复合支架体外捕获干细胞及其特性的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

论文三 动物体内实验评价雷帕霉素联合CD34抗体复合支架的有效性和安全性

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

本研究创新性自我评价

参考文献

综述 药物洗脱支架置入后再狭窄机制的研究进展

在学期间科研成绩

致谢

个人简历