初发1型糖尿病患儿外周血单个核细胞FOXP3和CTLA-4表达的研究

摘要

目的：
　　研究初发1型糖尿病（type1diabetesmellitus，T1DM）患儿外周血叉状头转录因子(Foxheadtranscriptionfactor3，FOXP3)和细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxicT-lymphocyteantigen-4，CTLA-4）表达，及患儿血清可溶性FOXP3和CTLA-4蛋白水平的变化，并观察其在不同1型糖尿病抗体、不同年龄组及T淋巴细胞亚群之间的表达差异，比较其与糖化血红蛋白(HbA1c)及C肽的相关性，探讨它们在1型糖尿病发病中所起的作用。
　　方法：
　　糖尿病组:选取初发T1DM患儿50例，男23例，女27例，年龄3-14岁，平均（8.8±2.9）岁;均符合ADA诊断标准，既往健康。对照组:健康儿童30例，男18例，女12例，年龄3-14岁，平均(8.2±2.8)岁，近期无感染史，无糖尿病家族史;均留取空腹静脉血3ml，抗凝，置-70℃保存。糖尿病患儿常规检测1型糖尿病抗体、T淋巴细胞亚群、HbA1c和C肽等项指标。标本解冻后提取mRNA，逆转录获取总cDNA，用real-timePCR法研究FOXP3和CTLA-4mRNA表达;ELISA方法检测血清中可溶性FOXP3和CTLA-4蛋白水平。采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析，计量资料用均数±标准差((x)±s)表示，多个样本均数的比较采用单因素方差分析，组间数据两两比较采用LSD-t法，两变量的相关分析采用Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　糖尿病患儿FOXP3mRNA表达低于对照组（0.95±0.48vs2.11±0.79，P＜0.01）;其血清可溶性FOXP3蛋白浓度亦低于对照组（6.27±1.49ng/mlvs9.02±2.37ng/ml，P＜0.01）;糖尿病患儿CTLA-4mRNA表达高于对照组（2.43±0.83vs1.94±0.84，P＜0.01）;其血清可溶性CTLA-4蛋白浓度亦高于对照组（77.88±22.34ng/mlvs65.97±12.11ng/ml，P＜0.01）。Pearson相关分析显示糖尿病患儿FOXP3和CTLA-4基因与蛋白表达均呈正相关（r=0.758，0.396;P＜0.05）;且FOXP3与CTLA-4蛋白表达有相关性（r=-0.624;P＜0.05）;糖尿病患儿FOXP3和CTLA-4mRNA及蛋白表达与HbA1c和C肽均无相关性(P＞0.05)。糖尿病患儿不同1型糖尿病抗体、不同年龄组之间外周血中FOXP3和CTLA-4基因及蛋白表达无统计学差异。1型糖尿病抗体阳性组B淋巴细胞所占比例高于抗体阴性组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论：
　　初发1型糖尿病患儿外周血FOXP3和CTLA-4基因与蛋白表达较对照组发生明显变化，且基因与蛋白表达均有相关性，提示通过调节两者基因及蛋白水平参与1型糖尿病的发病过程;我们的研究数据表明FOXP3与CTLA-4蛋白表达呈负相关，支持CTLA-4控制FOXP3在调节性T细胞(Tregulatorycell，Treg)的表达的观点。本研究未发现这两项指标基因及蛋白表达与C肽和糖化血红蛋白有相关性。实验数据显示1型糖尿病抗体阳性患儿外周血中B淋巴细胞所占百分比高于抗体阴性患儿，提示了体液免疫功能可能参与了T1DM的发生和发展。

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摘要

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研究对象与方法

结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 1型糖尿病中调节性T细胞的作用

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