UGT基因多态性对癫痫患儿拉莫三嗪/丙戊酸相互作用的影响

摘要

目的
　　建立测定血清拉莫三嗪浓度的高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)，同时建立UGT1A4142T＞G、UGT2B7-161C＞T和UGT2B7802C＞T的基因分型方法，探讨UGT1A4142T＞G、UGT2B7-161C＞T和UGT2B7802C＞T基因多态性对拉莫三嗪(lamotrigine，LTG)、丙戊酸(valproicacid,VPA)在中国癫痫患儿体内相互作用的影响。
　　方法
　　入选中国医科大学附属盛京医院就诊的单用VPA、单用LTG、合用VPA和LTG的儿童癫痫患者，患儿年龄为2～18岁。收集癫痫患儿的血液样本（稳态谷浓度）、基本信息（性别、年龄、体重、身高）、用药剂量、用药时长、肝肾功能等。按照患儿所服用抗癫痫药物类别，将患儿分为单用VPA组、单用LTG组及LTG、VPA合用组。
　　建立测定LTG血清药物浓度的高效液相色谱法，并测定单用LTG及LTG合并VPA患儿体内LTG血药浓度;采用荧光偏振免疫方法测定单用VPA及LTG合并VPA患儿体内丙戊酸血清药物浓度。
　　采用经典的酚-氯仿方法提取患儿基因组DNA，应用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(polymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism，PCR-RFLP)分析法和直接测序方法对入组患儿UGT1A4142T＞G、UGT2B7-161C＞T和UGT2B7802C＞T的基因型进行分析。应用多元线性回归分析影响LTG浓度的因素，应用方差分析、独立样本T检验、卡方检验对数据进行统计分析。
　　结果
　　建立了测定LTG血清药物浓度的HPLC方法并进行了方法确证，血清中LTG的线性范围为0.50-30.00μg/mL，定量下限为0.50μg/mL。LTG/VPA合用组(160名)、单用LTG组（20名）的LTG浓度分别为5.92±3.52μg/mL、1.84±1.07μg/mL(p＜0.001)，标准化血药浓度CDRLTG分别为2.43±1.31μg/mLpermg/kg、1.01±0.66μg/mLpermg/kg(p＜0.001)。LTG/VPA合用组、单用VPA组（127名）的VPA浓度分别为66.22±21.46μg/mL、63.65±25.43μg/mL(p=0.364)，CDRVPA分别为4.43±2.07μg/mLpermg/kg、4.44±2.50μg/mLpermg/kg(p=0.963)。
　　207名中国癫痫患儿UGT1A4142T＞G的等位基因频率为83.4％(T)、16.6％(G);UGT2B7-161C＞T的等位基因频率为62.5％(C)、37.5％(T);UGT2B7802C＞T的等位基因频率为63.1％(C)、36.9％(T)。对LTG/VPA合用药组LTG浓度进行多元线性回归分析，发现LTG浓度(Y)与性别(X1)、年龄(X2)、LTG日剂量(X3)、VPA浓度(X4)、UGT1A4142T＞G基因型(X5)存在良好的线性关系，线性回归方程为:Y=0.962X1-0.192X2+0.053X3+0.026X4+1.362X5-0.352，R2=0.609。
　　单用LTG组中UGT1A4142T＞G野生型(TT)与突变型（TG或GG）的LTG浓度分别为1.71±1.36μg/mL、1.95±0.81μg/mL(p=0.632)，CDRLTG分别为1.19±0.89μg/mLpermg/kg、0.87±0.37μg/mLpermg/kg(p=0.343)。而在LTG/VPA合用药组中，UGT1A4142T＞G突变型患儿的LTG浓度高于野生型，且有统计学意义（7.35±3.64μg/mLvs5.26±3.27μg/mL，p＜0.001），CDRLTG突变型亦高于野生型（3.05±1.69μg/mLpermg/kgvs2.14±0.96μg/mLpermg/kg，p＜0.001）。按患儿的VPA浓度将患儿分为三个亚组（低浓度:10-30μg/mL，中浓度:30-50μg/mL，高浓度:50-125μg/mL），当VPA在高浓度范围内时，UGT1A4142T＞G突变型的LTG浓度高于野生型（7.18±3.69μg/mLvs5.60±3.36μg/mL，p=0.015）;CDRLTG突变型高于野生型(3.15±1.76μg/mLpermg/kgvs2.22±0.95μg/mLpermg/kg，p＜0.001)。当VPA在中等浓度范围时，UGT1A4142T＞G突变型的LTG浓度高于野生型（7.98±3.94μg/mLvs4.09±3.10μg/mL，p=0.020），而CDRLTG则无统计学差异。当VPA为高浓度且UGT1A4142T＞G为突变型时，LTG浓度及CDRLTG均高于VPA低、中浓度组中UGT1A4142T＞G野生型患者，且有统计学差异(p=0.025，p=0.003)。当VPA在低浓度范围时，未发现UGT1A4142T＞G突变型与野生型患者间的LTG浓度及CDRLTG有统计学差异。在UGT1A4142T＞G分组的基础上考察年龄因素的影响，分为低年龄（2-6岁）、中年龄（6-9岁）、高年龄（9-18岁），结果显示在高年龄组且UGT1A4142T＞G野生型、突变型的CDRLTG分别为2.42±1.13μg/mLpermg/kg、3.11±1.73μg/mLpermg/kg，均高于低、中年龄组中UGT1A4142T＞G野生型的CDRLTG（1.72±0.88μg/mLpermg/kg、1.74±0.64μg/mLpermg/kg），(p=0.003，0.004，0.011，0.025)，但与低、中年龄组中UGT1A4142T＞G突变型的CDRLTG相比则无统计学差异。
　　结论
　　本研究建立了测定LTG血清药物浓度的HPLC方法，并测定了单用LTG及LTG/VPA合用患儿LTG血清药物浓度。结果显示，VPA能显著抑制癫痫患儿LTG体内代谢，LTG浓度升高;而LTG对VPA的血药浓度无影响。UGT1A4142T＞G突变型使LTG浓度升高，UGT2B7-161C＞T和UGT2B7802C＞T对LTG血药浓度无影响。LTG联合VPA时，LTG浓度与患儿性别、年龄、LTG日剂量、VPA浓度、UGT1A4142T＞G基因型相关。高年龄组儿童（9-18岁）或较高VPA浓度情况下，UGT1A4142T＞G突变型使LTG浓度升高，但单用LTG时，UGT1A4142T＞G基因型对LTG浓度无影响。本研究初步探讨了LTG联合使用VPA时，UGT1A4142T＞G基因多态性对癫痫儿童LTG体内代谢的影响，为LTG的个体化治疗提供了理论依据。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

论文一：癫痫患者拉莫三嗪、丙戊酸血药浓度测定及分析

材料与方法

实验结果

论文二：UGT1A4、UGT2B7基因多态性对LTG血药浓度影响的研究

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究的创新性和自我评价

参考文献

综述 拉莫三嗪药动学及其影响因素研究进展

在学期间科研成绩

致谢

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