碳酸酐酶IX在胰腺癌发生发展中作用的研究

摘要

目的:
　　探讨胰腺癌中碳酸酐酶Ⅸ(carbonic anhydraseⅨ，CAⅨ)表达的临床病理学意义;同时检测CAⅨ自身及碳酸酐酶抑制剂对胰腺癌细胞生物学行为的影响，以及调控胰腺癌细胞侵袭和迁移可能的机制。
　　方法:
　　收集2005年1月至2012年12月我院具有完整临床资料的胰腺导管腺癌手术切除标本58例，均有癌旁组织作为对照。另有18例胰腺癌及配对的癌旁组织新鲜标本。58例患者术后病理证实为胰腺导管腺癌，胰腺癌细胞系AsPC-1、BxPC-3、PANC-1及Miapaca-2常规培养及进行后续药物和转染实验。采用的实验方法:(1)免疫组织化学(IHC)检测58例配对的胰腺癌和癌旁组织中CAⅨ蛋白表达水平，探讨其表达的临床病理学意义。(2)细胞培养:AsPC-1、BxPC-3、PANC-1及Miapaca-2细胞按常规培养。(3)qRT-PCR检测CAⅨ的mRNA在胰腺癌细胞和组织中表达水平。(4)Western blot检测CAⅨ蛋白在胰腺癌细胞和组织中表达水平。(5)免疫荧光IF检测CAⅨ在细胞中表达水平及定位。(6)瞬时转染验证CAⅨ干扰效果同时，对细胞侵袭和迁移相关指标E-cad和vimentin的影响。(7)Transwell侵袭实验和细胞迁移实验检测CAⅨ沉默后胰腺癌细胞侵袭和迁移力的影响。(8)观察乙酰唑胺对CAⅨ表达的影响，同时通过Transwell侵袭实验和细胞迁移实验观察其对胰腺癌细胞侵袭和迁移力的影响。
　　结果:
　　(1)IHC结果显示:CAⅨ在58例配对的胰腺癌组织中表达明显高于癌旁正常组织(t=2.872;P=0.006)。CAⅨ主要呈胞浆和胞膜的表达，其高表达与胰腺癌的肿瘤大小(X2=5.066;P=0.024)及UICC分期(X2=5.553;P=0.018)呈正相关，但与患者性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、淋巴结转移、神经侵润及术前CA199水平无相关性。单因素分析发现，CAⅨ高表达胰腺癌患者预后差(P=0.016)，肿瘤UICC分期(P=0.005)、淋巴结转移(P=0.005)、血管侵润(P=0.044)及术后肝转移(P=0.001)同样是影响胰腺癌预后因素。多因素分析发现，CAⅨ表达(P=0.019)与胰腺癌术后肝转移(P=0.006)是影响胰腺癌患者预后独立危险因素。(2) Western blot结果显示:CAⅨ在18例胰腺癌中蛋白表达明显高于配对的癌旁正常组织(t=3.278;P=0.004)。qRT-PCR显示:CAⅨ在18例胰腺癌中mRNA表达明显高于配对的癌旁正常组织（t=2.449;P=0.025）。(3) Western blot和qRT-PCR结果显示:CAⅨ蛋白和mRNA表达在PANC-1和BxPC-3中较低，在AsPC-1和Miapaca-2中较高，故我们选择AsPC-1和Miapaca-2细胞拟下一步CAⅨ干扰实验。(4)IF同样显示CAⅨ荧光在PANC-1和BxPC-3中较弱，在AsPC-1和Miapaca-2中较强。其在胰腺癌细胞中主要呈胞浆的表达。(5)CAⅨ在AsPC-1和Miapaca-2细胞中有明显干扰效果，表现为蛋白和mRNA水平较对照组出现明显下调。但CAⅨ沉默并不影响与侵袭和迁移相关指标E-cad及vimentin的表达。(6)CAⅨ沉默明显抑制了AsPC-1和Miapaca-2胰腺癌细胞的侵袭和转移。(7)应用碳酸酐酶抑制剂乙酰唑胺能够抑制部分胰腺癌细胞的增殖，促进部分胰腺癌细胞的凋亡。抑制CAⅨ表达同时，同样抑制AsPC-1和Miapaca-2胰腺癌细胞的侵袭和转移。提示乙酰唑胺可能通过抑制CAⅨ表达调控胰腺癌的生物学行为。
　　结论:
　　(1)CAⅨ在胰腺癌组织中表达上调，且与肿瘤大小及UICC分期呈正相关。同时能够作为判断胰腺癌预后的独立危险因素。(2)CAⅨ在胰腺癌细胞中呈不同程度的表达，CAⅨ沉默抑制胰腺癌细胞的侵袭和迁移。(3)碳酸酐酶抑制剂乙酰唑胺能够抑制部分胰腺癌细胞的增殖，促进部分胰腺癌细胞的凋亡;同时乙酰唑胺通过抑制CAⅨ的表达同样抑制了胰腺癌的侵袭和迁移。有望成为新的抗肿瘤药物。

目录

声明

摘要

英文缩略语

论文一 胰腺癌中CA IX表达及与临床病理学特征的关系

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

论文二 CAIX基因对胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

论文三 碳酸酐酶抑制剂对胰腺癌细胞生物学行为的影响及调控胰腺癌细胞侵袭和迁移的可能机制

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

本研究创新的自我评价

参考文献

综述 碳酸酐酶IX的研究进展

在学期间科研成绩

致谢

个人简历