藤梨根提取物抗胆管癌作用的体内外实验研究

摘要

目的:
　　胆管癌是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤。近年来，其发病率在全球范围内呈上升趋势。其恶性程度高，发病隐匿，大多数患者在确诊时已丧失手术机会，且该病对放、化疗不敏感。因此临床迫切需要探讨对胆管癌更为有效的治疗方法。藤梨根具有清热解毒、消肿疥、祛风湿的功效。是临床上常用于抗肿瘤治疗的中草药，尤其对消化道肿瘤疗效较佳。近年体内外实验研究发现，藤梨根制剂对多种肿瘤有抑制作用，可通过多种途径发挥抗肿瘤作用，其药理研究和临床验证受到广泛关注。有关藤梨根提取物(Radix Actinidia Extractive，RAE)对胆管癌的作用尚未见报道。
　　本研究以人胆管癌细胞株QBC939细胞作为研究对象，采用MTS法、流式细胞术、形态学观察、Western blot及裸鼠移植瘤生长抑制作用实验等方法，观察RAE对人胆管癌细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用以及凋亡相关蛋白的表达情况，并观察RAE对QBC939细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用。
　　材料和方法:
　　体外培养人胆管癌QBC939细胞，取对数生长期细胞用于实验。将RAE用DMEM培养基稀释成低浓度组(1.25mg/ml)，中浓度组(2.5mg/ml)和高浓度组(5mg/ml)。采用MTS法检测不同浓度的RAE对QBC939细胞存活率的影响，及高浓度组RAE作用于QBC939细胞12h，24h，36h及48h对细胞存活率的影响;采用流式细胞术检测不同浓度组RAE对QBC939细胞的凋亡诱导作用;采用普通光学显微镜观察RAE处理前后细胞的形态学变化;采用Hoechst33342染色法观察RAE处理前后细胞核的染色情况;采用Western blot法检测RAE作用前后QBC939细胞Caspase-8，Caspase-3，cleaved-PARP，Survivin和Mcl-1蛋白的表达。建立人胆管癌QBC939细胞裸鼠皮下移植瘤模型，成瘤后随机分为对照组和实验组，分别每天腹腔注射生理盐水和RAE溶液，2周后比较终术肿瘤体积。
　　结果:
　　1、MTS实验:RAE处理后的细胞存活率明显低于对照组。细胞存活率在研究范围内与药物作用浓度及作用时间成负相关。
　　2、流式细胞实验:RAE处理后的细胞凋亡比例高于对照组。细胞凋亡比例在研究范围内与药物作用浓度成正相关。
　　3、形态学观察:随着RAE浓度增加及作用时间延长，QBC939细胞的细胞间隙增大，细胞胞浆中颗粒增多，细胞空泡化、脱壁，细胞周围碎片增多。Hoechst33342荧光染色观察到RAE处理组细胞核呈现块状、浓染荧光。
　　4、Western blot实验:与对照组相比，各个浓度RAE处理组的QBC939细胞活化型Caspase-8及Caspase-3蛋白表达升高，切割的PARP蛋白表达升高。Survivin及Mcl-1蛋白表达下降。
　　5、裸鼠移植瘤生长抑制作用实验:RAE处理组的裸鼠移植瘤终末肿瘤体积明显小于对照组。
　　结论:
　　RAE显著抑制QBC939细胞生长，其细胞生长抑制率与RAE浓度及作用时间呈正相关。
　　RAE可以诱导QBC939细胞凋亡，其凋亡诱导机制涉及到Caspase依赖性凋亡信号调节通路，其凋亡诱导作用可能与Survivin及Mcl-1蛋白表达下调有关。
　　RAE能明显抑制QBC939细胞裸鼠移植瘤的生长。

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材料与方法

结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 胆道恶性肿瘤分子靶向治疗研究进展

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