创伤后应激障碍大鼠额叶VDR表达变化的研究

摘要

创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder，PTSD)是精神障碍类疾病。近些年，随着自然灾害、恐怖活动和涉及个人生命安全事件的频发，其发病率也在升高。PTSD病程很长，也难以治愈，给家庭和社会带来很大的负担，这些特点引起人们对其越来越关注。目前，对PTSD还没有统一的定义，其发病机制也未阐明，但有关学者普遍认为导致PTSD发病的神经基础可能是神经元之间的突触效能的长时程增强。
　　目的：
　　1，25-二羟维生素D[1，25-Dihydroxyvitamin D，1，25-(OH)2D]是神经甾体激素，借助于维生素D受体(vitamin D receptor，VDR)发挥调节神经递质、保护神经和参与神经免疫的功能。VDR在额叶、海马结构和中脑内都有表达，且与神经系统生长发育有关。因此，其在有关脑区表达量的异常可能导致神经系统退行性障碍。单程长时应激(single prolonged stress paradigm，SPS)是公认的建立PTSD大鼠模型的方法。本实验SPS方法建立PTSD大鼠模型，通过检测分析PTSD大鼠额叶VDR的表达变化情况，讨论VDR与PTSD发病机制是否有相关性，力争为探索PTSD发病机制提供实验依据。
　　方法：
　　一、PTSD大鼠模型制备与实验分组
　　制备模型:成年的雄性SD大鼠，体重200-250g，全身束缚禁锢2小时后，马上强迫游泳20min（水深40cm，水温25℃），SD大鼠经过15min的休息，乙醚麻醉至意识丧失。
　　实验分组:PTSD模型大鼠随机分成4组:1d、3d、7d、14d组;未造模大鼠作为对照组。
　　二、行为学检测
　　各组大鼠先后进行旷场实验和高架十字迷宫实验，评估SPS对大鼠焦虑行为的影响。
　　三、取材
　　将大鼠麻醉、生理盐水灌注，而后断头取额叶脑组织，-70℃冻存备用(WesternBlot和RT-PCR)。
　　四、Western Blot
　　取大鼠额叶脑组织，剪碎裂解放置24h(4℃)，离心(12000 r/min，30 min、4℃)，取上清，蛋白定量。而后依次进行电泳、转膜、封闭、一抗(兔抗鼠多克隆抗体VDR，1∶500)4℃过夜、二抗（HRP标记羊抗兔IgG，1∶5000）37℃孵育1h、ECL发光显色和分析凝胶成像图像及统计。参照物选用抗GAPDH抗体。目的蛋白的相对表达量是该目的蛋白与相应GAPDH蛋白的灰度比值。
　　五、RT-PCR
　　大鼠额叶脑组织，提取总RNA，反转录合成cDNA，扩增完成后进行RT-PCR。
　　六、统计学处理
　　采用GraphPad Prim6.0统计软件进行统计学分析，所有实验数据均用均数±标准差（（x)±s）表示。各组VDR的比较采用单因素方差分析。以p＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　一、行为学检测结果
　　旷场实验结果显示:1d、3d、7d、14d组大鼠与对照组相比，在中心区域，停留的时间和运动的距离依次缩减，即实验组大鼠焦虑、恐惧等情绪反应的程度随时间的递增，呈上升趋势。
　　高架十字迷宫实验结果显示:1d、3d、7d和14d组大鼠与对照组相比，进入开放臂的次数依次减少，而进入非开放臂的次数依次增多，即实验组大鼠焦虑、恐惧等情绪反应的程度随时间的递增，呈上升趋势。
　　二、Western Blot
　　Western Blot结果显示:与对照组相比，在1d、3d和7d组大鼠，脑组织VDR蛋白的表达水平均有所增加，其中7d组VDR蛋白表达显著增加;而14d组大鼠脑组织VDR表达水平下降，与对照组相比没有统计学差异;1d、3d和7d组脑组织VDR蛋白表达大致呈逐渐上升趋势，但3d与7d组之间VDR蛋白表达无差异。
　　三、RT-PCR
　　RT-PCR结果显示:1d、3d和7d组与对照组相比VDR mRNA表达水平明显增高(P＜0.05)，其中7d组VDR mRNA表达量最显著;14d组VDR mRNA表达水平同对照组相比没有统计学差异。该结果与Western Blot分析结果基本一致。
　　结论：
　　1、PTSD大鼠额叶VDR表达先升高后降低。
　　2、PTSD大鼠行为学改变与额叶VDR表达存在相关性。

目录

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摘要

英文缩略语

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材料和方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 PTSD样大鼠边缘系统主要脑区的研究

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